Patologisk proteinuri er et av de viktigste og permanente tegn på nyre- og urinveis sykdommer. Bestemmelsen av urinproteinkonsentrasjon er et viktig og viktig element i urintesting. Identifikasjon og kvantifisering av proteinuri er viktig ikke bare i diagnose av mange primære og sekundære nyresykdommer, vurdering av alvorlighetsgraden av proteinuri endringer i dynamikk bærer informasjon om forløpet av patologisk prosess, effektiviteten av behandlingen. Deteksjon av protein i urinen, selv i spormengder, bør være alarmerende for mulig nyresykdom eller urinvei og krever reanalyse. Av spesiell oppmerksomhet er meningsløpet av urinforskning og spesielt bestemmelse av urinprotein uten å overholde alle regler for samlingen.

Alle metoder for å bestemme protein i urinen kan deles inn i:

• kvalitet,
• semikvantitativ,
• Kvantitativ.

Kvalitative metoder

Alle urinproteinprøver av høy kvalitet er basert på proteinens evne til å denaturere under påvirkning av ulike fysiske og kjemiske faktorer. I nærvær av protein i urinprøven, er det enten turbiditet eller tap av flokulerende sediment.

Betingelser for å bestemme protein i urinen basert på koagulasjonsreaksjonen:

1. Urin bør være sur. Den alkaliske urinen surgjøres med flere (2-3) dråper eddiksyre (5-10%).
2. Urin skal være tydelig. Turbiditet elimineres gjennom et papirfilter. Hvis uklarheten ikke forsvinner, legg til talkum eller brent magnesia (ca. 1 teskje per 100 ml urin), rist og filtrer.
3. Kvalitativ test skal utføres i to rør, en av dem - kontrollen.
4. Søk etter uklarhet bør være på svart bakgrunn i overført lys.

De kvalitative metodene for å bestemme protein i urinen inkluderer:

Som det fremgår av mange studier, gjør ingen av det store antallet kjente metoder for kvalitativ bestemmelse av protein i urinen det mulig å oppnå pålitelige og reproducerbare resultater. Til tross for dette, i de fleste CDL i Russland, blir disse metodene mye brukt som screening - i urinen med positiv kvalitativ respons utføres proteinkvantifisering videre. Av de kvalitative reaksjonene er en Geller-test og en prøve med sulfosalicylsyre mer vanlig, men en prøve med sulfosalicylsyre anses for det meste som den mest hensiktsmessige for å detektere patologisk proteinuri. Kokingstesten brukes for tiden praktisk talt ikke på grunn av dens arbeidsomhet og varighet.

Semikvantitative metoder

Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden er basert på Geller-ringtesten, slik at de samme feilene blir observert med denne metoden som med Geller-testen.

For tiden brukes diagnostiske striper i økende grad til å bestemme urinprotein. For den semikvantitative bestemmelsen av protein i urin på en stripe er det mest brukte fargestoffet bromfenolblått i citratbuffer. Proteininnholdet i urinen vurderes av intensiteten til den blågrønne fargen, som utvikler seg etter kontakt av reaksjonssonen med urin. Resultatet blir vurdert visuelt eller ved bruk av urinanalysatorer. Til tross for den store populariteten og åpenbare fordelene ved tørkemetoder (enkelhet, analysehastighet), er disse metodene for urinalyse generelt og proteinbestemmelse spesielt ikke uten alvorlige feil. En av dem, som fører til forvrengning av diagnostisk informasjon, er den større sensitiviteten til bromfenolblå indikator for albumin i sammenligning med andre proteiner. I denne forbindelse er teststrimmene hovedsakelig tilpasset påvisning av selektiv glomerulær proteinuri, når nesten alt urinprotein er representert av albumin. Med utviklingen av endringer og overgangen av selektiv glomerulær proteinuri til ikke-selektiv (utseendet av globuliner i urinen), blir resultatene av bestemmelsen av protein undervurdert i forhold til de sanne verdiene. Dette faktum gjør det umulig å bruke denne metoden for å bestemme protein i urinen for å vurdere tilstanden til nyrene (glomerulært filter) over tid. I tubulær proteinuri blir også resultatene av proteinbestemmelse undervurdert. Bestemmelse av protein ved hjelp av diagnostiske strimler er ikke en pålitelig indikator for lave nivåer av proteinuri (de fleste av de tilgjengelige diagnostiske strimlene har ikke evne til å fange protein i urin med en konsentrasjon lavere enn 0,15 g / l). Negative resultater av proteinbestemmelse på striper utelukker ikke tilstedeværelsen i urinen av globuliner, hemoglobin, uromucoid, Bens-Jones protein og andre paraproteiner.

Flager av slim med høyt innhold av glykoproteiner (for eksempel i inflammatoriske prosesser i urinveiene, pyuria, bakteriuri) kan slå seg på indikatorsonen av stripen og føre til falske positive resultater. Falske positive resultater kan også være forbundet med en høy konsentrasjon av urea. Dårlig belysning og dårlig fargeoppfattelse kan føre til unøyaktige resultater.

I dette henseende bør bruken av diagnostiske striper være begrenset til screeningsprosedyrer, og resultatene som er oppnådd med hjelpen, bør kun betraktes som indikativ.

Kvantitative metoder

Korrekt kvantitativ bestemmelse av protein i urinen er i noen tilfeller ikke en lett oppgave. Vanskelighetene med løsningen bestemmes av følgende antall faktorer:

• lavt proteininnhold i urinen til en sunn person, ofte på terskelen av følsomhet av mest kjente metoder;
• Tilstedeværelsen i urinen av mange forbindelser som kan forstyrre løpet av kjemiske reaksjoner;
• signifikante svingninger i innholdet og sammensetningen av urinproteiner i forskjellige sykdommer som gjør det vanskelig å velge et tilstrekkelig kalibreringsmateriale.

I kliniske laboratorier brukes de såkalte "rutinemessige" metodene for å bestemme protein i urinen hovedsakelig, men de gir ikke alltid tilfredsstillende resultater.

Fra en spesialistanalytiker som arbeider i laboratoriet, må metoden beregnet for kvantitativ bestemmelse av urinprotein oppfylle følgende krav:

• ha et lineært forhold mellom absorpsjonen av komplekset dannet under den kjemiske reaksjonen og proteininnholdet i prøven i et bredt spekter av konsentrasjoner, og dermed unngås ytterligere operasjoner ved fremstilling av prøven for studien;
• bør være enkel, ikke kreve høyt dyktig utøver, utføres med et lite antall operasjoner;
• har høy følsomhet, analytisk pålitelighet når man bruker små mengder av det studerte materialet;
• være motstandsdyktig mot ulike faktorer (variasjoner i prøvesammensetning, tilstedeværelse av stoffer, etc.);
• ha en akseptabel pris;
• være lett å tilpasse til automatiske analysatorer;
• Resultatet av bestemmelsen bør ikke avhenge av proteinsammensetningen i urinprøven.

Ingen av de kjente metodene for kvantitativ bestemmelse av protein i urin kan fullt ut hevde å være "gullstandarden".

Kvantitative metoder for å bestemme protein i urin kan deles inn i turbidimetrisk og kolorimetrisk.

Turbidimetriske metoder

Turbidimetriske metoder inkluderer:

• bestemmelse av protein med sulfosalicylsyre (SSC),
• bestemmelse av protein med trikloreddiksyre (THC),
• proteinbestemmelse med benzethoniumklorid.

Turbidimetriske metoder er basert på å redusere løseligheten av urinproteiner på grunn av dannelsen av en suspensjon av suspenderte partikler under påvirkning av utfellingsmidler. På proteininnholdet i testprøven er bedømmes enten ved lysspredning intensitet definert ved antall lysspredende partikler (nefelometrisk analyse-metoden), eller ved å svekke lysfluksen dannede suspensjon (turbidimetrisk analysemetode).

Størrelsen av lysspredning metoder i pretsipitatsionnyh protein i urinen deteksjon avhenger av en rekke faktorer: hastigheten for blandingen av reagenser, reaksjonstemperaturen, pH-verdien av mediet, nærværet av andre forbindelser, metoder fotometri. Forsiktig tilslutning til reaksjonsbetingelsene bidrar til dannelsen av en stabil suspensjon med en konstant partikkelstørrelse og oppnå relativt reproducerbare resultater.

Noen stoffer påvirker resultatene av turbidimetriske metoder for å bestemme protein i urinen, noe som fører til de såkalte "falske positive" eller "falske negative" resultatene. Disse inkluderer noen antibiotika (benzylpenicillin, cloxacillin, etc.), radioaktive jodholdige stoffer, sulfa-legemidler.

Turbidimetriske metoder er dårlig standardisert, og ofte fører til feilaktige resultater, men til tross for dette er de nå mye brukt i laboratorier på grunn av lave kostnader og tilgjengelighet av reagenser. Den mest brukte metoden i Russland er bestemmelsen av protein med sulfosalicylsyre.

Colorimetriske metoder

De mest følsomme og nøyaktige er kolorimetriske metoder for å bestemme urin totalt protein, basert på spesifikke fargeproteinreaksjoner.

Disse inkluderer:

1. biuretreaksjon,
2. Lowry metode
3. metoder basert på evne til forskjellige fargestoffer til å danne komplekser med proteiner:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallol rød.

Fra utøverens synspunkt, i laboratorieens daglige arbeid med en stor forskningsstrøm, er biuret-metoden ubeleilig på grunn av det store antallet operasjoner. På samme tid, idet fremgangsmåten kjennetegnes ved analytisk høy pålitelighet, gjør det mulig å bestemme proteinkonsentrasjonen i et vidt område og detektere albumin, globuliner og paraproteins med sammenlignbar følsomhet, hvorved biuret test betraktes som referanse for sammenligning og anbefaler andre analytiske metoder for påvisning av protein i urinen. Biuret-metoden for proteinbestemmelse i urin blir fortrinnsvis utført i laboratorier, kontorer tjener nephrological og bruk i de tilfeller hvor resultatene av bestemmelsen ved andre fremgangsmåter synes å være tvilsom, og for å bestemme den daglige proteintapet i nephrological pasienter.

Lowry-metoden, som har høyere følsomhet enn biuretmetoden, kombinerer biuretreaksjonen og Folin-reaksjonen til aminosyrene tyrosin og tryptofan i proteinmolekylet. Til tross for høy følsomhet gir denne metoden ikke alltid pålitelige resultater når proteininnholdet bestemmes i urinen. Årsaken til dette er den ikke-spesifikke interaksjonen av Folins reagens med ikke-proteinkomponenter av urin (oftest aminosyrer, urinsyre, karbohydrater). Adskillelsen av disse og andre urinkomponenter ved dialyse eller proteinutfelling gjør at man med hell kan bruke denne metoden for kvantitativ bestemmelse av urinprotein. Noen stoffer - salicylater, klorpromazin, tetracykliner er i stand til å påvirke denne metoden og forvride resultatene av studien.

Tilstrekkelig følsomhet, god reproduserbarhet og enkel å bestemme protein ved bindende fargestoffer gjør disse metodene lovende, men høye kostnader for reagenser forhindrer deres bredere bruk i laboratorier. For tiden blir pyrogallol-rødmetoden blitt mer vanlig i Russland.

Når man foretar en undersøkelse av proteinuriens nivå, må man huske på at ulike metoder for å bestemme proteinuri har forskjellig følsomhet og spesifisitet for mange urinproteiner.

Basert på empiriske data, anbefales det å bestemme proteinet ved hjelp av to forskjellige metoder og beregne den sanne verdien ved å bruke en av følgende formler:

proteinuri = 0,4799 B + 0,5230 L;
proteinuri = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinuri = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinuri = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinuri = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinuri = 0,8959 P + 0,0845 L;

der:
B - måleresultat med Coomassie G-250;
L er målesultatet med Lowrys reagens;
P - måleresultat med pyrogallolmolybdat;
S er måleresultatet med sulfosalicylsyre.

Med tanke på de utprøvde fluktuasjonene i nivået av proteinuri på forskjellige tidspunkter av dagen, så vel som avhengigheten av urinproteinkonsentrasjon på diurese, dets forskjellige innhold i individuelle urinportioner, er det nå vanlig for nyrepatologi å vurdere alvorlighetsgraden av proteinuri ved det daglige tapet av protein i urinen, det vil si å bestemme den såkalte daglig proteinuri. Det uttrykkes i g / dag.

Hvis det er umulig å samle daglig urin, anbefales det å bestemme konsentrasjonen av protein og kreatinin i en enkelt del av urinen. Siden hastigheten av kreatininfrigivelse i løpet av dagen er ganske konstant og ikke er avhengig av endringer i urineringshastigheten, er forholdet mellom proteinkonsentrasjon og kreatininkonsentrasjon konstant. Dette forholdet korrelerer godt med den daglige utskillelsen av protein og kan derfor brukes til å vurdere alvorlighetsgraden av proteinuri. Normalt protein / kreatininforhold bør være mindre enn 0,2. Protein og kreatinin måles i g / l. En viktig fordel ved metoden for å vurdere alvorlighetsgraden av proteinuri ved forholdet mellom protein-kreatinin er fullstendig eliminering av feil som er forbundet med manglende evne eller ufullstendig samling av daglig urin.

referanser:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Kliniske aspekter ved påvisning og evaluering av proteinuria", Håndbok av lederen av CPL, nr. 1, januar 2007
• A. V. Kozlov, "Proteinuria: metoder for deteksjon", forelesning, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, "Laboratoriediagnose av nyresykdom. Urinsyndrom ", - Håndbok av leder av KDL, nr. 12, desember 2006
• VI Pupkova, L.M. Prasolov - Bestemmelse av protein i urin og cerebrospinalvæske. Koltsovo, 2007
• Håndbok for kliniske laboratorieforskningsmetoder. Ed. E. A. Kost. Moskva, "Medisin", 1975

Relaterte artikler

Kvantitative metoder for å bestemme totalt urinprotein

Enhver urinprøve er egnet for proteinkvantifisering. De fleste forskere foretrekker å bestemme mengden protein i urinen samlet per dag for å fastslå det daglige tapet av protein.

Seksjon: Urinanalyse

Halvkvantitative metoder for bestemmelse av totalt protein i urinen

For tiden brukes diagnostiske striper i økende grad til å bestemme urinprotein. For den semikvantitative bestemmelsen av protein i urin på en stripe er det mest brukte fargestoffet bromfenolblått i citratbuffer. Proteininnholdet i urinen vurderes av intensiteten til den blågrønne fargen, som utvikler seg etter kontakt av reaksjonssonen med urin.

Seksjon: Urinanalyse

Kvalitative metoder for å bestemme totalt protein i urinen

Alle urinproteinprøver av høy kvalitet er basert på proteinens evne til å denaturere under påvirkning av ulike fysiske og kjemiske faktorer. I nærvær av protein i urinprøven, er det enten turbiditet eller tap av flokulerende sediment.

Seksjon: Urinanalyse

Bestemmelse av urinprotein i prøve med 20% sulfosalicylsyre

Prøven med 20% sulfosalicylsyre refererer til de kvalitative reaksjonene for bestemmelse av protein i urinen. Siden den er basert på koagulasjonsreaksjonen, må testet urin oppfylle visse krav: å være gjennomsiktig og ha en syrereaksjon.

Seksjon: Urinanalyse

Geller ringtest

Geller ringetesten er en kvalitativ reaksjon for å bestemme urinprotein. Siden den er basert på koagulasjonsreaksjonen, må testet urin oppfylle visse krav: å være gjennomsiktig og ha en syrereaksjon.

Seksjon: Urinanalyse

Metoder for bestemmelse av protein i urinen

En liten mengde protein i den daglige urinen finnes også hos helt friske personer, men slike små konsentrasjoner blir ikke påvist i enkelte porsjoner ved bruk av nåværende metoder. Ca. 70% av urinproteinene til en sunn person står for uromucoid, et protein som er et produkt av nyrevevet; Dermed er andelen glomerulært protein i urinen hos friske mennesker ubetydelig, og proteinuri er normalt 50-150 mg / dag, hvor de fleste urinproteiner er identiske med valle.

Det er akseptert å skille mellom følgende former for proteinuri, avhengig av opprinnelsesstedet: prerenal, assosiert med forbedret vevsprotein-sammenbrudd, alvorlig hemolyse; nyre, på grunn av patologi av nyrene, som kan deles inn i glomerulær og rørformet; postrenal, assosiert med patologi i urinveiene og oftest forårsaket av inflammatorisk ekssudasjon.

Avhengig av varigheten av eksistensen, avgir de vedvarende proteinuri, som eksisterer i mange uker og til og med år, og forbigående, forekommer periodisk, noen ganger selv i fravær av nyresykdom, for eksempel med feber og alvorlig rus. Det er tilrådelig å skille mellom variabiliteten av proteinuri: med daglig tap av protein opp til 1 g - moderat, fra 1 til 3 g - medium og mer enn 3 g - uttalt.

Deteksjon i urinen av proteiner med en relativt stor molekylvekt indikerer fraværet av selektivitet av renalfiltret og dets uttalt skade. I disse tilfellene snakk om lav selektivitet av proteinuri. Derfor er for tiden definisjonen av urinproteinfraksjoner blitt utbredt. De mest nøyaktige metodene er elektroforese i stivelse og polyakrylamidgeler.
Ifølge resultatene oppnådd ved disse metodene kan man dømme selektiviteten til proteinuri.

De fleste kvalitative og kvantitative metoder for å bestemme protein i urinen er basert på koagulasjon i volumet av urin eller ved grensesnittet mellom medier (urin og syre); hvis det er en måte å måle intensiteten av koagulasjon på, blir prøven kvantitativ.

Forenet sulfosalicylsyreanalyse:

Nødvendig reagens:

20% sulfosalicylsyreoppløsning.

Studienes forløb:

I 2 reagensrør, hell 3 ml filtrert urin. I reagensrøret tilsettes 6-8 dråper reagens. På en mørk bakgrunn sammenligne kontrollrøret med en erfaren. Turbiditet i testrøret indikerer tilstedeværelsen av protein, prøven anses som positiv.

Hvis reaksjonen av urinen er alkalisk, så blir den forsynt med 2-3 dråper av en 10% vandig oppløsning av eddiksyre før undersøkelsen.

Brandberg-Roberts-Stolnikov enhetlig metode:

Metoden er basert på Geller-ringprøven, som består i det faktum at koaguleringen ved grensen av salpetersyre og urin, i nærvær av protein, opptrer og en hvit ring oppstår.

Nødvendig reagens:

30% løsning av salpetersyre (relativ tetthet 1,2) eller reagens Larionic.
Fremstilling av reagensen Larion: 20-30 g natriumklorid oppløses ved oppvarming i 100 ml destillert vann, får avkjøles, filtreres. Til 99 ml av filtratet helles 1 ml konsentrert salpetersyre.

Studienes forløb:

1-2 ml salpetersyre (eller larionsyrereagens) helles i røret og forsiktig, over rørets vegg, blir samme mengde filtrert urin lagd. Utseendet til en tynn hvit ring ved grensesnittet mellom to væsker mellom 2. og 3. minutt indikerer tilstedeværelsen av protein i en konsentrasjon på ca. 0,033 g / l. Hvis ringen vises tidligere enn 2 minutter etter lagring, bør urin fortynnes med vann og omlegges allerede utvannet urin. Graden av fortynning av urin er valgt avhengig av typen av ring, dvs. dens bredde, kompaktitet og utseende. Med en trådlignende ring, som dukket opp tidligere 2 minutter, blir urinen fortynnet 2 ganger, med en bred en - 4 ganger, med en kompakt en - 8 ganger etc. Proteinkonsentrasjonen beregnes ved å multiplisere 0,033 med fortynningsgraden og uttrykkes i gram pr. L (g / l).

Noen ganger oppnås en hvit ring når store mengder urater er til stede. I motsetning til proteinringen er uratet litt høyere enn grensen mellom to væsker og oppløses når den er litt oppvarmet.

Kvantitativ bestemmelse av protein i urinen ved turbiditet, dannet ved tilsetning av sulfosalicylsyre:

Prinsippet av metoden:

Intensiteten av turbiditet under proteinkoagulering med sulfosalicylsyre er proporsjonal med konsentrasjonen.

Påkrevde reagenser:

1. 3% sulfosalicylsyreoppløsning.

2. 0,9% natriumkloridoppløsning.

3. Standard albuminløsning - 1% løsning (1 ml oppløsning inneholdende 10 mg albumin): 1 g lyofilisert albumin (fra humant eller bovint serum) oppløses i en liten mengde 0,9% natriumkloridoppløsning i en kolbe med en kapasitet på 100 ml, og deretter justert til merket med samme løsning. Reagenset stabiliseres ved tilsetning av 1 ml 5% natriumazidoppløsning (NaN3). Ved oppbevaring i kjøleskapet er reagenset gyldig i 2 måneder.

Spesialutstyr - fotoelektrisk kolorimeter.

Studienes forløb:

1,25 ml filtrert urin ble introdusert i et reagensrør, gjort opp til 5 ml med 3% sulfosalicylsyreoppløsning og blandet. Etter 5 minutter måles de på et fotoelektrisk kolorimeter ved en bølgelengde på 590-650 nm (oransje eller rødt lysfilter) mot en kontroll i en celle med en optisk bane lengde på 5 mm. Kontrollen er et rør hvor 1,25 ml filtrert urin ble tilsatt opp til 5 ml 0,9% natriumkloridoppløsning. Beregningen utføres i henhold til kalibreringsskjemaet, for konstruksjonen av hvilke fortynninger som fremstilles fra standardløsningen, som angitt i tabellen.

Fra hver resulterende oppløsning tas 1,25 ml og behandles som eksperimentelle prøver.

Rektilinær avhengighet ved bygging av en kalibreringsgraf er lagret opptil 1 g / l. Ved høyere konsentrasjoner skal prøven fortynnes og ta hensyn til fortynningen i beregningen.

Falske positive resultater kan oppnås hvis det er kontrastmidler i urinen som inneholder organisk jod. Derfor kan testen ikke brukes til personer som tar iodpreparater; Et falskt positivt resultat kan også skyldes sulfanilamidpreparater, store doser penicillin og i høye konsentrasjoner i urin av urinsyre.

Biuret metode:

Prinsippet av metoden:

Peptidbindingene av proteinet med kobbersalter i alkalisk C danner et kompleks av lilla farge. Proteiner er pre-utfelt med trikloreddiksyre.

Påkrevde reagenser:

1. 10% oppløsning av trikloreddiksyre.
2. 20% kobberoppløsning (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. 3% NaOH-oppløsning.

Studienes forløb:

Til 5 ml urin tatt fra den daglige mengden, tilsett 3 ml trikloreddiksyreoppløsning, sentrifugert til et konstant volum av sediment. Supernatanten suges av med en pipette, utfellingen oppløses deretter i 5 ml NaOH-oppløsning. 0,25 ml CuSO4 tilsettes oppløsningen, blandingen omrøres og sentrifugeres. Supernatanten blir fotometrisert ved en bølgelengde på 540 nm i en kuvette med en optisk bane lengde på 10 mm mot destillert vann. Konsentrasjonen av proteinet beregnes ut fra kalibreringskurven, mens konsentrasjonen av proteinet (g / l) plottes på y-aksen og den optiske tettheten i utryddelsesenheter på abskisseaksen. Basert på oppnådd konsentrasjon, beregnes daglig tap av protein i urin.

Bruke indikatorpapir (strimler):

Protein kan detekteres ved hjelp av indikatorpapir (strips), som er produsert av "Albuphan", "Ames" (England), "Albustix", "Boehringer" (Tyskland), "Comburtest" etc.

Prinsippet er basert på fenomenet den såkalte proteinfeilen på enkelte syrebaserte indikatorer. Indikatordelen av papiret er mettet med tetrabromfenolblått og citratbuffer. Når papiret er fuktet, oppløses bufferen og gir den riktige pH for indikatorreaksjonen.

Ved 3,0-3,5 reagerer aminogrupper av proteiner med indikatoren og endrer sin opprinnelige gule farge til en grønn blå, hvorpå man, i forhold til fargeskalaen, kan estimere proteinkonsentrasjonen i urinen grovt. Hovedforutsetningen for korrekt drift av indikatorstrimler er å gi en pH i området 3,0-3,5 for reaksjonen skal forekomme.

Hvis papiret er i kontakt med urinen under studie lenger enn eksponeringen som er angitt i instruksjonene, oppløses citratbufferen i den, og deretter reagerer indikatoren til den ekte pH i urinen, dvs. gir en falsk positiv reaksjon. På grunn av det faktum at bufferkapasiteten er begrenset, oppnås falske positive resultater, selv om retningslinjene følges i prøver av for alkalisk urin (pH> 6,5), og i urin med urin med pH, pH 6,5, med lav relativ tetthet urin og ved lav konsentrasjon av bensonprotein.

Påkrevde reagenser:

2 M acetatbuffer pH 4,9.

Studienes forløb:

Den filtrerte urinen i mengden 4 ml blandes med 1 ml buffer og oppvarmes i 15 minutter i et vannbad ved en temperatur på 56 ° C. I nærvær av Bens-Jones-proteiner vises et uttalt utfelling innen 2 minutter, og hvis Bens-Jones-proteinkonsentrasjonen er mindre enn 3 g / l, kan prøven være negativ. I praksis er dette ekstremt sjeldent, siden for det meste konsentrasjonen av Bens-Jones protein i urinen er signifikant.

Med full sikkerhet kan Bens-Jones-proteinet detekteres ved en immunoelektroforetisk studie ved bruk av spesifikk serum mot de tunge og lette kjedene i immunoglobuliner.

Bestemmelse av albumose (proteose):

Albumoser er produkter av proteinspaltning, hvis prinsipp bygger på det faktum at de ikke brettes når de kokes, men gir en positiv biuretreaksjon og saltes ut med noen salter, spesielt ammoniumsulfat og sinkacetat i et surt medium.

Normal urin inneholder ikke albumose. Spor kan være i normal urin i tilfelle urenhet av sæd. I patologi kan albumose forekomme i urinen under febrile forhold, blod- og plasmetransfusjoner, resorbsjon av ekssudater og transsudater og desintegrasjon av svulster.

Påkrevde reagenser:

1. Mettet natriumkloridløsning.
2. Konsentrert kaustisk sodavannløsning.
3. En svak løsning av kobbersulfat (nesten fargeløs).

Studienes forløb:

En mettet løsning av natriumklorid (1/3 volum) tilsettes urin surgjort med eddiksyre, kokes og den varme væsken filtreres. Albumoser går inn i filtratet, hvor deres tilstedeværelse bestemmes av en biuretreaksjon. Til filtratet tilsett 1/2 volum av en konsentrert løsning av kaustisk soda og noen få dråper svak løsning av kobbersulfat. Med en positiv prøve oppnås en rødviolett farge.

Med en positiv test med sulfosalicylsyre oppvarmes urinen. Hvis uklarheten forsvinner og dukker opp igjen når den avkjøles, betyr det at urinen inneholder albumoser eller proteinlegemet til Bens-Jones.

Protein i urinen, laboratorietester

Metoder for bestemmelse av urinprotein

For klinikken gjelder både kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av protein i urinen.

Kvalitative tester for å bestemme urinprotein
Foreslo mer enn 100 reaksjoner for kvalitativ bestemmelse av protein i urinen. De fleste av dem er basert på proteinutfelling ved fysiske (oppvarming) eller kjemiske midler. Tilstedeværelsen av protein er bevist ved utseende av turbiditet.

Også av interesse er kolorimetriske tørreprøver.

Nedenfor beskrives bare det viktigste for praksisprøver.

Sulfosalicylsyreanalyse. Til noen få milliliter urin tilsetter 2-4 dråper av en 20% løsning av sulfosalicylsyre. Når en positiv reaksjon oppstår uklarhet. Resultatet er betegnet med vilkårene: opalescens, en svakt positiv, positiv eller sterkt positiv reaksjon. Sulfosalicylsyre-testen er en av de mest sensitive prøvene for å etablere protein i urinen. Hun finner selv de minste unormale økninger i urinprotein. Takket være en enkel teknikk har denne testen funnet en bred applikasjon.

Test med aseptol. Aseptol er en erstatning for sulfosalicylsyre. Den kan fremstilles av materialer som er tilgjengelige i et hvilket som helst laboratorium (fenol og svovelsyre). Som reagens brukes en 20% aseptoloppløsning. Testen utføres som følger: I et reagensrør som inneholder 2-3 ml urin, tilsetter 0,5-1-1 ml aseptoloppløsning til bunnen. Hvis en hvit ring av koagulert protein dukker opp ved grensen mellom to væsker, er prøven positiv.

Geller test. Under noen få milliliter urin saltes 1-2 ml 30% salpetersyre (spesifikk tyngdekraft 1,20). Hvis en hvit ring produseres ved grensesnittet til begge væsker, er prøven positiv. Reaksjonen blir positiv dersom proteinet er større enn 3,3 mg%. Noen ganger oppnås en hvit ring når store mengder urater er til stede. I motsetning til proteinringen kommer uratringen ikke til å ligge ved grensen mellom de to væskene, men litt høyere. Larionova foreslår å bruke i stedet for 30% salpetersyre som en reagens 1% løsning av salpetersyre i en mettet løsning av natriumklorid; Dette gir store besparelser i salpetersyre.

Prøve med zhelezystosinerodisty kalium og eddiksyre. Denne reaksjonen gjør det mulig å isolere serumproteiner fra nukleoalbumin.

Like store mengder urin helles i to rør. I en av dem tilsettes noen dråper 30% oppløsning av eddiksyre. Hvis det oppnås turbiditet i forhold til kontrollrøret, inneholder urin nukleoalbumin. Hvis det ikke oppstår uklarhet, blandes innholdet i begge rørene og deles igjen i to deler. I ett av de to rørene legges noen dråper (et overskudd kan gjøre en positiv prøve til en negativ) av en 10% løsning av det gule blodsaltet (kaliumferrocyanid). I nærvær av myseproteiner oppnås turbiditet.

Med konsentrert urin som inneholder store mengder urinsyre og urat, bør en prøve med jern- og sirupkalium og eddiksyre utføres etter foreløpig fortynning (2-3 ganger) med urin med vann. Ellers kan det oppstå turbiditet forårsaket av utfelt urinsyre.

Dette er spesielt viktig i studien av urin hos spedbarn, som inneholder mye urinsyre og urater.

Av resten av de kvalitative prøvene for protein i urin, basert på proteinutfelling, har de funnet søknad: kokende test, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia, etc.

Ved produksjon av høyverdige prøver for protein i urinen, basert på deponering av proteiner, er det nødvendig å observere følgende generelle regler, hvis brudd fører til signifikante feil i studien.

1. Urinen som skal testes må være sur. Med en alkalisk reaksjon blir urinen litt syret med eddiksyre. Fremstillingen av en prøve med alkalisk urin i tilfeller hvor en syre brukes som reagens, kan føre til nøytralisering av syren og til et negativt resultat med positiv reaksjon. Dette gjelder spesielt for sulfosalicylsyre-testen, siden syren tilsettes i svært små mengder og lett kan nøytraliseres.

2. Undersøgt urin skal være gjennomsiktig.

3. Prøver for å etablere protein i urinen bør alltid gjøres i to rør, hvorav den ene tjener som en kontroll. Uten kontrollrør kan man ikke merke svak turbiditet under reaksjoner.

4. Mengden tilsatt syre i prøvene bør ikke være for stor. En stor mengde syre kan føre til dannelse av oppløselig acidolbumin og til transformasjon av en positiv prøve til en negativ.

På grunn av deres enkle teknikk fortjener kolorimetriske tørre prøver mye oppmerksomhet. Når disse prøvene brukes, har effekten det proteinet på fargen på indikatoren i bufferløsningen (såkalte proteinfeilindikatorer). Et filterpapir infundert med sitronsyrebuffer og bromfenolblått som indikator, absorberes i urin i kort tid. Prøven er positiv hvis den blir blågrønn farge. Sammenligne intensiteten av farging med fargepapirstandarder, er det mulig å utlede omtrentlige og kvantitative konklusjoner. Indikatorpapir selges i pakker med tilhørende fargestandarder, som universelt indikatorpapir.

Metoder for kvantitativ bestemmelse av urinprotein
Mange metoder har blitt foreslått for kvantitativ bestemmelse av urinprotein. Eksakte kvantitative metoder for bestemmelse av proteiner i biologisk materiale blir ikke mye brukt i bestemmelsen av protein i urinen på grunn av komplekse og tidkrevende teknikker. Volumetriske metoder er utbredt, spesielt Esbach-metoden. De er veldig enkle, men er dessverre ikke veldig nøyaktige. Metodene til Brandberg-Stolnikov-gruppen, som gir mer nøyaktige resultater enn volumetriske metoder, med en relativt enkel teknikk, er også praktiske for klinikken. I nærvær av et fotometer eller nephelometer er nephelometriske metoder også hensiktsmessige.

Esbach Metode. Han ble foreslått av den parisiske legen Esbach i 1874. Et spesialrør (Esbachs albuminometer) helles med urin og reagens. Røret er forseglet med en gummipropp, grundig omrørt (uten å slå!) Og forlatt i oppreist stilling til neste dag. Rapporter divisjonen, som når kolonnen av proteinutfellingen. Antallet som er funnet, viser proteininnholdet. Det er svært viktig med Esbach-metoden at urinen er sur. Alkalisk urin kan nøytralisere de sure bestanddelene av reagenset og forhindre utfelling av proteiner.

Fordeler med metoden: Det er enkelt og praktisk i praksis.

Ulemper: Metoden er unøyaktig, resultatet blir oppnådd etter 24 - 48 timer.

Brandberg-Stolnikov metode. Det er basert på Gellers kvalitetstest. Gellers prøve kan brukes til kvantitativ bestemmelse, siden det gir et positivt resultat med et proteininnhold på over 3,3 mg%. Dette er den ultimate proteinkonsentrasjonen under hvilken prøven blir negativ.

Modifikasjon av Ehrlich og Althausen. Sovjetiske forskere S. L. Ehrlich og A. Ya. Altgauzen endret Brandberg-Stolnikov-metoden, som angir mulighetene for å forenkle forskning og spare tid i produksjonen.

Den første forenkling er knyttet til tidspunktet for utseendet på ringen. Det er bestemt nøyaktig tidspunktet for utseendet hans, uten nødvendigvis å følge det andre og tredje minuttet.

Den andre forenklingen gjør det mulig å fastslå hvilken type oppdrett som skal gjøres. Forfatterne har bevist at den nødvendige fortynningen kan være omtrentlig fastslått av den type ring som er oppnådd. De skiller filamentøse, brede
og kompakt ring.

Av nephelometriske metoder fortjener Kingsberry og Clark-metoden å bli notert. 2,5 ml filtrert urin helles i en liten gradert sylinder, etterfylles med 3% vandig oppløsning av sulfosalicylsyre til 10 ml. Rør grundig og etter 5 minutter fotometeriseres i en 1 cm kuvette, med et gult filter, med vann som kompensasjonsvæske. Med Pulfrich-fotometeret finner utryddelsen, multiplisert med 2,5, mengden protein i% o. I tilfelle når utryddelsesindeksen er høyere enn 1,0, er urinen forfortynnet 2 ganger, 4 ganger eller enda mer.

For å få en klar ide om mengden proteiner utskilt i urinen, er det nødvendig å bestemme ikke bare konsentrasjonen i en separat del av urinen, men også deres totale daglige mengde. For å gjøre dette må du samle pasientens urin i 24 timer, måle volumet i milliliter og bestemme proteinkonsentrasjonen i en del av daglig urin i g%. Mengden proteiner som utskilles i urinen om 24 timer, bestemmes avhengig av den daglige mengden urin i gram.

Den kliniske signifikansen av protein i urinen

Menneskelig urin inneholder vanligvis små mengder protein som ikke kan etableres ved vanlige prøver med kvalitativ urinproteinprøve. Ekskresjon av store mengder protein, hvor vanlige høyverdige prøver for protein i urinen blir positive - et unormalt fenomen, kalt proteuri. Proteinuri er fysiologisk bare hos nyfødte, i de første 4-10 dagene etter fødselen. Navnet albuminuri, som ofte brukes, er feil, fordi ikke bare albumin, men også andre typer proteiner (globuliner, etc.) utskilles i urinen.

Proteinuri, som et diagnostisk symptom, ble oppdaget i 1770 av Cotuno.

Den viktigste funksjonelle renalproteinuri hos barn er som følger:

1. Fysiologisk proteinuri av det nyfødte. Det forekommer hos de fleste nyfødte og har ingen negativ betydning. Det forklares av et umodent nyrfilter, fødselsskader eller tap av væsker i de første dagene av livet. Fysiologisk proteinuri forsvinner på 4-10 dag etter fødselen (hos prematur babyer senere). Mengden protein er liten. Det er et nukleobalbumin.

Neonatal albuminuri, som varer lenge, kan være et symptom på medfødte lunger.

2. Stroke albuminuri. De er forårsaket av å overskride terskelen for normal irritabilitet av nyrene filteret ved betydelig mekanisk, termisk, kjemisk, mental og andre irritasjoner - tap av væske hos spedbarn (dehydreringsproteinuri), kaldt bad, rikelig proteinrik mat (matproteinuri), palpasjon av nyrene (palpatorisk albuminuri) fysisk overarbeidet, frykt, etc.

Strokealbuminuri fremstår lettere hos barn i tidlig alder enn hos barn i eldre alder og hos voksne, siden nyrene til et spedbarn og et lite barn er lettere irritert. Dehydrering albuminuri (fôrforstyrrelser, hydrolerbarhet, toksisitet, diaré, oppkast) er spesielt vanlig hos spedbarn.

Stroke albuminuri er godartet. De forsvinner umiddelbart etter eliminering av årsakene deres. Noen ganger forekommer leukocytter, sylindere og røde blodlegemer i sedimentet. Protein er oftest nukleoalbumin.

3. Ortostatisk proteinuri. Denne tilstanden er karakteristisk for barn i førskole og skolealder. Det skjer på grunnlag av vasomotoriske forstyrrelser i blodtilførselen til nyrene. Typisk for ortostatisk albuminuri (dermed navnet) er at det bare vises når barnet står når ryggraden er i lordotisk stilling. I den bakre posisjonen forsvinner den. Nukleobalbuminet frigjøres. I tvilsomme tilfeller kan du ty til ortostatisk opplevelse, som består av følgende: om kvelden, en time før du legger ned, tømmer barnet blæren; om morgenen går han ut av sengen og frigir urinen igjen. Denne urinen inneholder ikke protein. Da legges barnet på knærne i 15-30 minutter med en pinne bak ryggen, mellom albuene i begge hender bøyd. Det skaper en posisjon av lordose, som fører til frigjøring av protein, uten endringer i sediment.

Med ortostatisk albuminuri kan 8-10 g protein slippes ut per dag.

Organisk renal proteinuri har stor klinisk betydning mellom all proteinuri. De er forårsaket av organiske nyresykdommer (nephritis, nephrosis, nephrosclerosis). Proteinuri er et av de viktigste og mest kjente symptomene på organisk nyresykdom.

1. I akutt og kronisk glomerulonephritis forekommer proteinuri regelmessig. Mengden protein er moderat, og det er ingen parallell mellom graden av proteinuri og alvorlighetsgrad av sykdommen. I kontrast oppstår kronisk og strengere jade ofte med mindre mengder protein enn akutt. Etter akutt nephritis, noen ganger i lang tid (år), etableres små mengder protein i urinen, uten patologisk betydning ("gjenværende albuminuri"). Det bør ikke glemmes at "nefritt uten proteinuri" også kan forekomme. Noen ganger er protein funnet i en del av urinen, og i en annen er det ikke. Forholdet mellom albumin og globuliner i akutt nephritis er lavt, og i kronisk nephritis er høyere.

2. I tilfelle nefrosclerose er mengden proteiner i urinen ganske ubetydelig, ofte former for sykdommen uten protein i urinen.

3. Av alle nyresykdommer forekommer nephrosis med den mest utprøvde proteinuri.

4. I tilfelle av smittsomme og giftige forhold, finner man den såkalte febrile og giftige proteinuri. Dette er akutt nephrose, hvor mengden protein er liten. Denne gruppen inkluderer også proteinuri i konvulsive tilstander (kramper), hypertyreoidisme, gulsott, invagasjoner, enteroklititt, brannskader, alvorlig anemi, etc. Disse albuminuriene er godartede og går fort (forbigående albuminuri).

5. Når blod stagnerer i nyrene, oppstår den såkalte kongestivalbuminuri som er karakteristisk for kardiovaskulære pasienter i dekompensasjonstrinnet. Det finnes også i ascites og svulster i magen.

I febril, giftig og kongestiv albuminuri, er den økte permeabiliteten av nyrfilteret spesielt uttalt. Ifølge noen forfattere forekommer mange på disse proteinuriene uten organisk skade på renal parenchyma.

Eksternalbuminuri er vanligvis forårsaket av urenheter i protein (sekreter, nedbruddceller) som utskilles av den syke urinveiene og kjønnsorganene. Ofte finnes eksternalbuminuri som skyldes cystopielitt (pyuria), mindre ofte på grunn av vulvovaginitt, kalk- og urinvekttumorer.

Når extrarenal albuminuri i sedimentet finner et stort antall leukocytter og bakterier. Nyrer er nesten aldri forekommende. Mengden protein er liten. Filtrert eller sentrifugert urin gir vanligvis ikke en positiv proteinprøve.

Hos mennesker som gjenoppretter fra pyelitt, forsvinner albuminuri etter bakteriuri og pyuria.

Det bør understrekes som et karakteristisk fenomen som i tidlig barndom er organiske nyresykdommer ekstremt sjeldne, derfor er organisk proteinuri også sjeldne. Av dem finnes hovedsakelig febrile og giftige. I motsetning til organisk proteinuri, er strokealbuminuri svært vanlig hos små barn.

Hos eldre barn er organisk proteinuri mer funksjonelt. Generelt, med alder, er funksjonell proteinuri mindre vanlig, og økologisk oftere.

Elektroforetiske studier av proteiner i urinen

En rekke forfattere bruker den elektroforetiske metoden for undersøkelse av proteiner i urinen (uroproteiner). Fra det oppnådde elektroforegrammet er det klart at de har samme kvalitative sammensetning som plasmaproteiner. Dette indikerer at proteiner i urinen stammer fra plasmaproteiner.

Kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av protein i urinen.

Normale verdier: Normalt protein i urinen finnes i minimale mengder som ikke oppdages av de vanlige kvalitative reaksjonene. Øvre grense for normen for protein i urin er 0,033 g / l. Hvis proteininnholdet er høyere enn denne verdien, blir proteinprøver av høy kvalitet positiv.

Den kliniske betydningen av definisjonen:

Utseendet av protein i urinen kalles proteinuri. Proteinuri kan være falsk og nyre. Ekstrarenal proteinuri kan være i nærvær av urenheter av proteinopprinnelse fra kjønnsorganene (vaginitt, uretrit, etc.), mens mengden protein er ubetydelig - opptil 0,01 g / l. Renal proteinuri kan være funksjonell (med hypotermi, fysisk anstrengelse, feber) og organisk - med glomerulonefrit, pyelonefrit, nefrit, nephrose, nyresvikt. I renal proteinuri kan proteininnholdet være fra 0,033 til 10-15 g / l, noen ganger høyere.

Prinsippet av metoden: er basert på det faktum at protein under virkningen av uorganiske syrer koagulerer (blir synlig). Graden av turbiditet er avhengig av mengden protein.

Påvisning av protein i urinen med 20% sulfosalicylsyre.

Reagenser: 20% oppløsning av sulfosalicylsyre. Utstyr: mørk bakgrunn.

1. Krav til urin: Urin må være sur (eller svakt sur) pH, må være gjennomsiktig. I dette formålet blir urinen sentrifugert. Alkalisk urin surgjøres til et svakt surt reaksjonsmedium ved bruk av indikatorpapir for kontroll.

2. I 2 reagensrør med samme diameter, helle 2 ml forberedt urin. 1 testrør - kontroll, 2 - opplevelse. Til forsøksrøret tilsettes 4 dråper 20% sulfosalicylsyre.

3. Resultatet er merket på en mørk bakgrunn.

4. I nærvær av protein blir urinen i testrøret grumlig.

Kvalitetsbestemmelse av protein i urin ved teststrimler.

For å identifisere proteinuri brukes forskjellige monotest strips: Albufan, Albustiks, Biofan E og politiske tester: Triscan, Nonafan og andre.

Påvisning av protein i urinen ved hjelp av metoden til Roberts - Stolnikov.

Prinsippet av metoden: er basert på det faktum at protein under virkningen av uorganiske syrer koagulerer (blir synlig). Graden av turbiditet avhenger av mengden protein (dvs. Geller-ringtesten). Når proteinkonsentrasjonen i urinen er 0,033 g / l, vises en tynn hvit tråd på slutten av 3 minutter etter lagring av urin.

Reagenser: 50% løsning av salpetersyre eller Roberts reagens (98 deler av en mettet løsning av natriumklorid og 2 deler konsentrert saltsyre) eller reagens av Larionic (98 deler av en mettet løsning av natriumklorid og 2 deler konsentrert salpetersyre).

Utstyr: mørk bakgrunn.

1. Krav til urin: Urin må være sur (eller svakt sur) pH, må være gjennomsiktig. I dette formålet blir urinen sentrifugert. Alkalisk urin surgjøres til et svakt surt reaksjonsmedium ved bruk av indikatorpapir for kontroll.

2. Hell 2 ml 50% oppløsning av salpetersyre eller et av reagensene i et reagensrør, og hell deretter forsiktig det samme volumet tilberedt urin langs rørets vegg med en pipette.

3. Prøven er igjen i 3 minutter

4. Etter 3 minutter rapporterer du resultatet. Resultatet er merket på en mørk bakgrunn i overført lys. Hvis ringen er bred, kompakt, blir urinen fortynnet med destillert vann og igjen lagret på reagenset.

5. Urin fortynnes til etter 3 minutter dannes en tynn trådformet ring.

6. Beregningen av proteininnholdet i urinen produseres i henhold til formelen:

C = 0,033 g / l x fortynningsgrad.

194.48.155.245 © studopedia.ru er ikke forfatter av materialene som er lagt ut. Men gir mulighet for fri bruk. Er det et brudd på opphavsretten? Skriv til oss | Kontakt oss.

Deaktiver adBlock!
og oppdater siden (F5)
veldig nødvendig

Metodisk utvikling av praktiske klasser "Bestemmelse av protein i urinen" (1 kurs)

Capital Training Center
Moskva

Emne: Bestemmelse av urinprotein.

Mål: Å studere studien av urinens kjemiske egenskaper.

Å studere kvantitative og kvalitative metoder for å bestemme urinprotein;

Lær de grunnleggende prinsippene for å arbeide med teststrimler på automatiske analysatorer.

Ansettelsestype: praktisk (6 timer)

Studentene bør vite:

Kvalitative prøver for proteinbestemmelse.

Roberts - Stolnikov metode.

Bestemmelse av protein 3% SSC.

Biuret-metode for proteinbestemmelse (THU).

Diagnostisk verdi av forskningsindikatorer.

Studenten skal kunne:

Forbered en arbeidsplass for urintesting.

Forbered reagenser, servise og utstyr til studien.

For å bestemme kjemiske egenskaper av urin (protein i urinen ved kvalitative og kvantitative metoder).

Arbeid med blanke produkter (utforming av analyseskjemaer).

Korrekt tolke resultatene av studien.

Midler for å nå målet:

1. Arbeid med notater, pedagogisk og spesiell litteratur.

2. Forberedelse til praktiske øvelser ved bruk av lærerens metodiske anbefalinger, gjennomføring og gjennomføring av praktisk arbeid.

3. Arbeid med informasjonsmidler for utdanning i elektroniske og papirmedier.

Utstyr for stuer og kontor arbeidsstasjoner:

seter av antall studenter;

lærerens arbeidsplass;

spesialiserte møbler og utstyr.

Tekniske treningsverktøy:

datamaskiner for å utstyre lærerens og elevers arbeidsplass;

tekniske enheter for audiovisuell visning av informasjon;

audiovisuelle undervisningsmidler (presentasjon, opplæringsvideo).

Resultatet av å mestre leksjonen er:

Dannelse av praktiske faglige ferdigheter og første praktisk erfaring, inkludert profesjonell (PC) og generell (QA) kompetanse:

PC 1.1. Klargjør en arbeidsplass for laboratorieundersøkelser.

PC 1.2. Å gjennomføre laboratorie kliniske studier av biologiske materialer.

PC 1.3. Ta opp resultatene av forskningen.

PC 1.4. Kast brukt materiale, desinfiser og steriliser brukt glassvarer, verktøy og verneutstyr.

OK 1. Forstå naturen og samfunnets betydning for deres fremtidige yrke, vis en jevn interesse i den.

OK 2. Organiser dine egne aktiviteter, velg standardmetoder og måter å utføre profesjonelle oppgaver på, evaluer effektiviteten og kvaliteten.

OK 6. Arbeid i et lag og et lag, kommuniser effektivt med kolleger, ledelse, pasienter.

OK 9. Å bli veiledet i forhold til endring av teknologi i faglig aktivitet.

OK 13. Å organisere en arbeidsplass i samsvar med kravene til arbeidssikkerhet, industriell hygiene, smitte og brannsikkerhet.

I-modulen. Den teoretiske delen med elementene i selvstendig arbeid

Oppgave nummer 1. Studere og skissere studiemateriell i arbeidsbøker.

En sunn person inneholder vanligvis mindre enn 0,002 g / l og sjelden opptil 0,012 g / l protein, og vanligvis kalles dette urinproteininnholdet "i form av spor" og detekteres ikke ved konvensjonelle kjemiske metoder i sunn human urin.

Proteininnholdet i porsjoner av urin samlet på forskjellige tidspunkter av dagen kan variere betydelig.

Protein i urinen kalles proteinuri.

Avhengig av det daglige tapet av protein, utmerker seg følgende grader av proteinuri: moderat - opptil 1 g; medium - fra 1 til 3 g; uttalt - mer enn 3 g.

Det er to hovedtyper proteinuria:

Proteinuri, forårsaket av sykdommer i urinveiene;

proteinuri, med lesjoner (sykdommer) av nyrene.

Proteinuri forbundet med inflammatoriske prosesser i urinveiene, ledsaget av utseendet i urinen av et betydelig antall leukocytter eller erytrocytter, som imidlertid ikke eliminerer samtidig inntrenging av protein i urinen fra renal parenchyma; proteininnhold overstiger sjelden 1 g / l.

Renal proteinuri er i de fleste tilfeller forbundet med økt permeabilitet av glomeruli og er delt inn i 2 grupper:

Til fysiologisk proteinuri inkluderer tilfeller av midlertidig utseende av protein i urinen, ikke forbundet med sykdommer:

etter å ha spist en stor mengde mat rik på ikke-denaturerte proteiner (rå kjøtt, rå egg);

med intensiv muskelarbeid (lange turer, sportsarrangementer);

når du tar kaldt bad eller dusj;

med sterke følelsesmessige erfaringer;

med epileptiske anfall.

Distinguish ortostatisk eller ungdommelig proteinuria, forekom hos barn og ungdom og passerer i alderen. I det differensialdiagnostiske forhold er det av praktisk betydning at ortostatisk albuminuri ofte er funnet i gjenvinningsperioden fra akutt glomerulonephritis.

Patologisk renal proteinuri kan være et resultat av organiske sykdommer i nyrene og andre organer og systemer: akutt glomerulonephritis; kronisk glomerulonephritis; akutt pyelonefrit; kronisk pyelonefrit; nefropati av gravide kvinner; ulike sykdommer forbundet med feber; alvorlig kronisk hjertesvikt; og mild nyresykdom; lipoid nefrose; nyre tuberkulose; hemorragiske feber; hemorragisk vaskulitt; alvorlig anemi hypertensjon, etc.

Oppgave nummer 2. Skriv om og tegne diagrammer av laboratoriemetoder for å bestemme protein i urinen.

Laboratoriemetoder for bestemmelse av protein i urinen

Det er kvalitative og kvantitative metoder for å bestemme protein i urinen, de er basert på koagulering av protein i volumet av urin eller på grensen til media (urin og syre); mens måling av graden av koagulasjon gjør prøven kvantitativ.

prøve med 20% sulfosalicylsyre (standardisert);

Geller ring test (for tiden ikke brukt);

protein deteksjon ved hjelp av indikator papir (strips) og test strips.

Den enhetlige Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden;

med 3% sulfosalicylsyre.

Kvalitative metoder for å bestemme protein i urinen

Oppgave nummer 3. Bestemmelse av protein i urinen ved bruk av en standardisert prøve med 20% sulfosalicylsyre

Prinsippet av metoden: er basert på koagulering av protein i volumet av urin eller på grensen til media (urin og syre)

Retter, utstyr og reagenser:

20% sulfosalicylsyre (2-hydroksy-5-sulfobenzoic acid C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml filtrert urin

2 stk kjemiske reagensrør

Tre rør av filtrert urin innføres i to rør, 6-8 dråper sulfosalicylsyre blir tilsatt til en av dem (erfarne). På en mørk bakgrunn sammenlignes begge rørene.

Tolkning av resultatene:

Opacification i testrøret indikerer tilstedeværelse av protein i urinen - prøven er positiv.

Merk. Alkalisk urin surgjøres før testen ved å legge til noen dråper 10% eddiksyreoppløsning.

Oppgave nummer 4. Bestemmelse av protein ved bruk av Geller-ringtesten

Prinsippet for metoden: Ringeprøven er basert på det faktum at når salpetersyre blir tilsatt til urinen ved grensesnittet (syreurin) i nærvær av protein, koagulerer det og en hvit ring kommer frem.

Retter, utstyr og reagenser:

- reagenser: 30% salpetersyreoppløsning (HNO 3) (d = 1,2) eller laryonsyreaktivt middel: 20-30 g natriumklorid (NaCl) oppløst i 100 ml destillert vann ved oppvarming, avkjøling, filtrering; 1 ml konsentrert HNO3 blir tilsatt til 99 ml av filtratet.

I røret helles 1 - 2 ml av en 30% løsning av HNO 3 eller Larionovas reagens og forsiktig lag samme mengde filtrert urin på veggen.

Tolkning av resultatene:

Utseendet ved grensen til to væsker mellom 2. og 3. minutt av en tynn hvit ring indikerer tilstedeværelsen av protein i urinen.

Tegn et skjema for å bestemme proteinet

Proteinkvantifisering

Prinsippet for metoden: Geller-ringprøven er basert på det faktum at når salpetersyre legges til urinen ved grensesnittet (syreurin) i nærvær av protein, koagulerer det og en hvit ring kommer frem.

Retter, utstyr og reagenser:

Biologisk væske (urin);

I røret helles 1 - 2 ml av en 30% løsning av HNO 3 eller Larionovas reagens og forsiktig lag samme mengde filtrert urin på veggen.

Tolkning av resultatene:

Utseendet ved grensen til to væsker mellom 2. og 3. minutt
en tynn hvit ring indikerer tilstedeværelsen av protein i en konsentrasjon på ca. 0,033 g / l. Hvis en ring oppstår tidligere enn 2 minutter etter laminering, bør urin fortynnes med destillert vann og testes med fortynnet urin. Graden av fortynning av urin er valgt avhengig av type ring, dens bredde, kompaktitet og utseende.

Med en trådlignende ring, som dukket opp tidligere 2 minutter, blir urinen fortynnet 2 ganger, med en bred en - 4 ganger, med en kompakt en - 8 ganger etc. Proteinkonsentrasjonen beregnes ved å multiplisere fortynningen med 0,033 g / l.

En hvit ring kan dannes når det er et stort antall urater; i motsetning til protein, virker det litt over grensen til to væsker og oppløses når den er litt oppvarmet.

Oppgave nummer 6. Bestemme mengden protein i urinen med 3% sulfosalicylsyre

Prinsippet for metoden: Konsentrasjonen av protein i urinen er proporsjonal med den turbiditeten som oppstår når den koagulerer sulfosalicylsyre

Retter, utstyr og reagenser:

0,9% natriumkloridoppløsning;

1% albuminstandardløsning - 1 g lyofilisert albumin (fra humant eller bovint serum) oppløses i en liten mengde 0,9% NaCl-oppløsning i en kolbe med en kapasitet på 100 ml, og deretter opp til merket med det samme løsningsmidlet. Reagenset stabiliseres ved tilsetning av 1 ml 5% natriumazidoppløsning (NaN3). Ved oppbevaring i kjøleskapet er reagenset stabilt i 2 måneder.

1,25 ml filtrert urin innføres i et reagensrør, 3,75 ml av en 3% sulfosalicylsyreoppløsning tilsettes og blandes. Etter 5 minutter blir prøven fotomettet på en PEC ved en bølgelengde på 590-650 nm (oransje eller rødt lysfilter) mot kontrollen i en kuvette med en optisk bane lengde på 5 mm. Kontrollen tjener som en prøve hvor 3,75 ml av en 0,9% natriumkloridoppløsning settes til 1,25 ml urin. Proteinkonsentrasjonen beregnes i henhold til en kalibreringsgraf for konstruksjonen som de fremstiller fortynninger av en standard albuminløsning. (se tabell). Fra hver fortynnet oppløsning oppnås 1,25 ml og behandles som eksperimentelle prøver.

Fremstilling av fortynninger for å plotte kalibrering

Standard løsning, ml

0,9% natriumkloridoppløsning, ml

Proteinkonsentrasjon, g / l

Rektilinær avhengighet av omfanget av utryddelsen og proteinkonsentrasjonen opprettholdes opp til 1 g / l. Ved høyere proteinkonsentrasjoner skal prøven fortynnes og ta hensyn til fortynningen i beregningen.

Hvis det finnes stoffer som inneholder jod i urinen, kan man få falske positive resultater. Derfor kan testen ikke brukes til pasienter som tar iodpreparater eller som har gjennomgått forskning ved bruk av jodholdige radioaktive forbindelser. Falske positive J-reaksjoner i løpet av studien kan skyldes å ta sulfanilamid-legemidler, store doser penicillin og i høye konsentrasjoner i urin av urinsyre.

Tegn et skjema for å bestemme proteinet

Oppgave nummer 7. Bens-Jones-deteksjon i urin

Prinsippet av metoden: Basert på reaksjonstermutfällingen

Retter, utstyr og reagenser:

Reagens: 2M acetatbuffer pH 4,9.

4 ml filtrert urin blandes med 1 ml bufferoppløsning og oppvarmes i 15 minutter i et vannbad ved 56 ° C.

Tolkning av resultatene:

I nærvær av Bens-Jones protein i urinen, opptrer et uttalt sediment i de første 2 minuttene.

Når proteinkonsentrasjonen er mindre enn 3 g / l, kan prøven være negativ, noe som er ganske sjelden, siden vanligvis er konsentrasjonen av Bens-Jones protein i urinen svært viktig.

Den mest pålitelige gjenkjenningen av Bens-Jones-proteinet er ved utfelling ved en temperatur på 40-60 ° C. Imidlertid kan det ikke forekomme sedimentasjon i for surt (pH under 3,0) eller for alkalisk (pH over 6,5) urin, med lav relativ tetthet i urin og lav konsentrasjon av Bens-Jones beige (mindre enn 3 g / l).

Tegn et skjema for å bestemme proteinet

II-modulen. Uavhengig arbeid med forskningsfasen

Oppgave nummer 1. Undersøk og skisser søknaden №1 "Deteksjon av protein ved hjelp av diagnostiske teststrimler"

- Hent prøver av biologisk væske (urin) fra læreren, nummer prøver;

- Utfør en urintest ved hjelp av diagnostiske teststrimler;

- Vurder resultatet (norm, patologi). Anta at årsaken til protein i urinen.

- Skriv resultatet i analyseformene, overlevert dem til læreren.

"Deteksjon av protein ved hjelp av diagnostiske teststrimler"

Prinsipp. Protein endrer fargen på indikatoren på strippen. Indikatorene er pakket i et sett med 100 striper, som er lagret i et tett lukket blyanthus på et kjølig og tørt sted.

Regler for arbeid med diagnostiske teststrimler

Når du arbeider med diagnostiske teststrimler, må du følge følgende regler:

- Hold diagnostiske teststrimler i tett lukket beholderpakker;

- å lagre tilfeller i et mørkt, tørt, kjølig sted ved en temperatur som ikke overstiger 30ºС, men ikke i kjøleskapet;

- Ikke utsett stripene for fuktighet og direkte sollys, høy temperatur og flyktige kjemikalier;

- få bare det strengt nødvendige antallet strimler, og så lukk saken umiddelbart

- Ikke berør de diagnostiske sonene med fingrene.

Testregler

1. For studien, bruk morgenurin samlet inn i en plastbeholder med engangsbruk (eller rene, tørre retter). Bland den leverte urinen, men ikke sentrifuger.

Ved bruk av ikke-standardjustert emballasje forårsaker rester av vaskemiddel i urinoppsamlingsbeholderen falske resultater.

2. Ta en teststrimmel fra blyanthuset.

3. Lukk saken med fabrikslokket, beskytt straks mot fuktighet.

4. Senk indikatorpapirstrimlene i 2-3 sekunder inn i urinen som undersøkes, og fjern dem umiddelbart.

5. For å fjerne overflødig fuktighet fra stripens diagnostiske soner, kjør den med en lang kant langs kanten av beholderen (eller annen beholder der urinen leveres) eller fest kanten av strimlen til filterpapir.

Det er umulig å vaske av overflødig urin fra diagnostiske soner.

6. Etter den tid som er oppgitt på etiketten til beholderen eller i instruksjonene for hver test, utløp, sammenlign fargen på den tilsvarende diagnostiske sonen med fargeskalaen på etiketten på beholderen med striper (standard). Testprosedyren er vist i figurene 1-7.

7. Reaksjonen vurderes som positiv eller negativ. Eller uttrykt numerisk i g / l. (se tegning №8).