INSTRUKSJONER

om bruk av et reagenssett for kolorimetrisk bestemmelse av protein i urin og cerebrospinalvæske med pyrogallolrød

Pakken inneholder:

200 ml (2 x 100 ml P + 2 x 2 ml kalibrator)

500 ml (2 x 250 ml P + 2 x 5 ml kalibrator)

Prinsipp for metoden

Når protein interagerer med pyrogallol rødt og

natriummolybdat danner et farget kompleks,

hvis fargeintensitet er proporsjonal med konsentrasjonen

Kit Innhold

Reagens (P) - pyrogallol rød løsning i succinat

buffer klar til bruk.

Kalibratorer - Lavkalibreringsproteinløsninger (0,20

g / l, brukes til å bestemme mikroproteinuri) og høye

(0,50 g / l, brukt til å bestemme proteinuri)

proteinkonsentrasjon inneholdende 70% albumin og 30%

globulin klar til bruk.

Oppbevaringssett - ved en temperatur på 2-8 ° C i en pakke

produsent for hele holdbarheten.

Stabilitet av reagens og kalibratorer

Etter åpning er reagenset stabilt i 6 måneder, kalibratorer - 3 måneder. Ved lagring i tett lukket form ved en temperatur på 2-8 ° C på et mørkt sted.

Normale verdier

• urin - opptil 0.120 g / l (opptil 0,141 g / dag);
• cerebrospinalvæske (CSF) - 0,150-0,450 g / l.

Prøver for analyse

Urin, ikke-hemolysert CSF.

Forberedelse for analyse

1. CSF og urin sentrifugert i 10 minutter ved 2700-4000 rpm.
2. Bruk rene, godt vasket rør for analyse. Testen for testrørenees egnethet for analyse er fraværet av fargeendring i reagenset. Hvis reagensen blir blå uten å legge til en prøve, blir resultatene av proteinbestemmelse overvurdert; Deretter dispensere reagenset først og tilsett deretter urin.
3. Ved oppsett av metoden bør nye kuvetter brukes, siden de ikke er flekket med reagenset og reaksjonsprøven. Gamle plastkuvetter (uklar, ikke gjennomsiktig) er ikke egnet for måling. Før bruk, bruk kuvetter som ble brukt som følger: La i 10 minutter i vaskeoppløsningen (200 ml 5% hydrogenperoksidoppløsning eller 1 ml vaskemiddel), skyll deretter med sprut og destillert vann minst 10 ganger. Kittet er egnet for analyse på biokjemiske halvautomatiske og automatiske analysatorer.

Analyse Bølgelengde: 598 (578-620) nm; Optisk bane lengde: 10 mm; temperatur: 18-25 ° C.

Reagens og kalibrator skal oppbevares ved romtemperatur i ca. 30 minutter før analyse.

Fremgangsmåte 1 (bestemmelse av proteinuri)

Prøv å blande, hold i 10 minutter ved romtemperatur (18-25 ° C). Mål den optiske tettheten til eksperimentelle (E) og kalibrering (EC) prøver mot kontroll (blank) prøven. Fargen er stabil i 1 time.

HVORDAN GJELDER VI I URIN SULFOSALYCYL METODEN?

I vårt land brukes en turbidimetrisk metode som bruker en sulfosalicylsyre (sulfosalicylmetode), som først ble foreslått av Kingsbury F, hovedsakelig for å bestemme proteinkonsentrasjonen i urinen. B. og medforfattere i 1926. Samtidig bruker laboratoriene i utviklede land praktisk talt ikke denne metoden, og resultatet er at laboratoriekvalitetskontrollen av urinproteinanalysen viser en nedgang i variasjonskoeffisienten. Så i 1993 utførte 60% av franske kliniske diagnostiske laboratorier bestemmelsen av urinproteinkonsentrasjon ved bruk av en kolorimetrisk metode ved bruk av pyrogallol rødt fargestoff (pyrogallolmetode) og kun 10% ved hjelp av sulfosalicylmetoden. Diagnostiske kits for å bestemme urinprotein basert på pyrogallolmetoden produseres av slike kjente selskaper som Bayer D iagnostics, Beckman, Biiodirect, Biocon Diagnostics, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Dessverre, i vårt land, av økonomiske årsaker og delvis på grunn av mangel på erfaring, brukes kolorimetriske metoder for å bestemme urinprotein fortsatt svært lite.

Spørsmålet oppstår - hvor begrunnet er nektelsen av laboratorier i industrilandene å bruke den enkle og, viktigst, billige metoden. For å klargjøre dette problemet, sammenlignet vi resultatene av å bestemme proteinkonsentrasjonen i pasientens urin ved to metoder: sulfosalicylic [1] og pyrogallol [2].

Fremgangsmåten for måling av konsentrasjonen av protein ved hver fremgangsmåte var som følger.

Reagenser: 3% sulfosalicylsyreoppløsning, 0,9% natriumkloridoppløsning,

Kalibrator (kalibreringsoppløsning av serumalbumin, 50 g / l, i natriumkloridoppløsning, 0,9% og natriumazid, 0,095%) fra "Uni-Test - Total Protein" -settet produsert av "Diakon DS" Om Unimed ".

Utstyr: spektrofotometer SF-2000 produsert av OKB "Spectr".

Målingskurs: 0,5 ml filtrert urin og 1,5 ml av en 3% sulfosalicylsyreoppløsning ble tilsatt til en kvartkvette med en optisk bane lengde på 1 cm og omrørt. Etter 10 minutter ble den optiske tettheten målt på et spektrofotometer ved en bølgelengde på 595 nm mot en blindprøve (kyvett med 0,5 ml urin og 1,5 ml 0,9% natriumkloridoppløsning). Beregningen av proteinkonsentrasjonen ble utført i henhold til kalibreringsskjemaet. For dens konstruksjon, fortynninger av en standardløsning av humant serumalbumin i 0,9% natriumkloridoppløsning med konsentrasjoner på: 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / l. For hver av de fremstilte løsningene ble målingen utført på samme måte som med en urinprøve. Kalibreringsgraf er vist i figur 1.

Fig. 1. Kalibreringskurve for bestemmelse av protein i urinen ved sulfosalicylmetode.

Et kommersielt sett produsert av Biocon Diagnostik (Tyskland) - Fløytest USP - Protein, en ultrafølsom metode basert på det røde pyrogallol-molybdatkomplekset, ble brukt.

Reagenser: pyrogallolrød, 0,06 mmol / l, natriummolybdat, 0,04 mmol / l, succinatbuffer 50 mmol / l, pH 2,5, vaskemidler 2%; Kalibrator (kalibreringsoppløsning av serumalbumin, 50 g / l, i natriumkloridoppløsning, 0,9% og natriumazid, 0,095%) fra "Uni-Test - Total Protein" -settet produsert av "Diakon DS" Om Unimed ". [3].

Utstyr: biokjemisk fotometer StatFax 1904 Plus ("Awareness Technology inc.", USA).

Kalibreringskurven for den beskrevne metoden med forholdet mellom prøve / reagens - 1 / 12,5 ble oppnådd ved bruk av spesielt fremstilte løsninger av serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, g / l ved å fortynne kalibratoren (50 g / l) med 0,9% natriumkloridoppløsning, (fig.2).

Fig. 2. Kalibreringskurve for pyrogallol-rødmetode, Fløyeste USP-reagens, Biocon Diagnostik (Tyskland) med et prøve / reagensforhold på 1 / 12,5.

80 μl ble tatt fra hver proteinløsning og blandet med 1,0 ml reagens; målt som urinprøver.

Fig. 3. Et diagram over sammenligneligheten av resultatene av måling av proteininnholdet i urinprøver ved hjelp av sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder.

Kalibreringskurven for reagenset produsert av Unimed A / O og Biocon Diagnostik, med et prøve / reagensforhold på 1/30, ble oppnådd ved bruk av spesielt fremstilte løsninger av serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,85; 1,9; 2,0 g / l ved å fortynne kalibratoren (50 g / l) med 0,9% natriumkloridoppløsning (Fig.4).

Fig. 4. Kalibreringskurver for Unimed A / O-reagens (øvre graf) og Flittest USP-sett fra Biocon Diagnostik (nedre graf) med et prøve / reagensforhold på 1/30.

50 μl ble tatt fra hver proteinoppløsning og blandet med 1,5 ml reagens og målt som urinprøver.

I studien, for å oppnå maksimal følsomhet for pyrogallolmetoden, ble den modifiserte, svært sensitive varianten anvendt. For dette er volumet av tilsatt urin økt. Målingskurs: 1 ml av hovedreagenset ble tilsatt til alle rør, deretter ble 80 μl destillert vann (blind) tilsatt til det første rør, 80 μl sentrifugert urin ble tilsatt til de gjenværende rørene, inkubert ved romtemperatur i 10 minutter, og den optiske densitet av prøven ble målt mot blankt 600 nm bølgelengde og 650 nm differensialfilter

For å sammenligne metodene for å bestemme konsentrasjonen av protein i urinen, ble 60 pasienter av urinen målt ved sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder.

Sensitiviteten til metoder for måling av protein i urinen ble vurdert ved å undersøke forberedte urin-vandige oppløsninger som inneholdt lave konsentrasjoner av serumalbumin (fra 0 til 0,05 g / l). For pyrogallol- og sulfosalicylmetoder undersøkte vi også verdiene for ikke-spesifikk absorpsjon på grunn av fargen på urinprøven. For dette ble den optiske densitet av urinprøver målt hvor i stedet for sulfosalicylsyre eller pyrogallolreagens ble tilsatt en ekvivalent mengde saltoppløsning.

For å vurdere effekten av matrisen (urin) på resultatene av sulfosalicylmetoden ble følgende eksperimenter utført.

1) I urinprøver uten protein, i henhold til pyrogallol- og sulfosalicylmetodene (n = 43) ble humant serumalbumin tilsatt ved en sluttkonsentrasjon på 0,4 g / l. Deretter ble proteinkonsentrasjonen i de fremstilte prøver bestemt ved anvendelse av de ovennevnte metoder.

2) Urinprøver (n = 16), som hadde et protein i henhold til pyrogallolmetoden, ble fortynnet to ganger med en 0,9% natriumkloridoppløsning. De oppnådde prøver ble undersøkt med sulfosalicylmetoden, proteinkonsentrasjonen ble omberegnet for fortynning.

Forskningsresultater og diskusjon

En studie av urinprøver med spesifikke albuminkonsentrasjoner viste at den minste detekterbare albuminkonsentrasjonen (metodefølsomhet) var 0,033 g / l for sulfosalicylmetoden og 0,012 g / l for pyrogallolmetoden.

Resultatene av målinger i form av et diagram for sammenligning av resultatene av måling av proteininnholdet i urinprøver ved hjelp av sulfosalicylsyre (ordinat akse) og pyrogallol (abscissa akse) -metoder er vist i figur 3. Den faste skrå linje på grafen tilsvarer likestillingen av måleresultatene ved to metoder. Hvis begge metodene ga tilsvarende verdier, må poengene i grafen grupperes nær den faste linjen. Dataene vist i fig. 3, kan vi også merke seg at sulfosalicylmetoden konsekvent viste lavere proteinkonsentrasjoner i alle urinprøver sammenlignet med pyrogallolmetoden.

Som studien viste, mellom resultatene oppnådd ved bruk av sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder, er det ingen overbevisende statistisk forbindelse. I tillegg, sammenlignet med pyrogallolmetoden, viste sulfosalicylmetoden i 95% urinprøver lavere verdier av proteinkonsentrasjon. Samtidig ga i 86% av tilfellene målingen ved sulfosalicylmetoden undervurderte resultater med to eller flere ganger i forhold til pyrogallolmetoden.

Samtidig viste sulfosalicylmetoden i noen tilfeller nærvær av protein i prøven på grunn av den mørke farge eller økt turbiditet av den studerte urinen. Det ble etablert at ved bestemmelse av proteinet ved sulfosalicylmetoden (prøve / reagensforhold = 1/3) ved en bølgelengde på 595 nm kan bidraget fra urinprøven på grunn av farge eller turbiditet til resultatet være fra 0 til 0,247 g / l (gjennomsnittsverdi - 0,031 g / l). Det skal således bemerkes at ved bruk av sulfosalicylmetoden er bruk av en kontrollprøve (urinprøve + saltvann) for hver urinprøve obligatorisk. Når protein ble bestemt ved pyrogallolmetoden, påvirket ikke fargene eller graden av urinprøve i urinprøven resultatet.

Eksperiment i vurderingen av matrisens virkning (urin) viste at i nesten alle preparerte urinprøver inneholdende 0,4 g / l albumin var konsentrasjonen bestemt ved sulfosalicylmetoden under 0,4 g / l i gjennomsnitt med 20% (grenseværdier proteinkonsentrasjon 0,29-0,34 g / l). Samtidig, når målingen av proteinkonsentrasjonen i disse prøvene ble målt ved pyrogallolmetoden, var resultatene for alle prøver i området 0,40-0,46 g / l. Videre ble det funnet at i 5 ut av 16 dobbeltfortynnede urinprøver var proteinkonsentrasjonen 15-33% høyere enn i de tilsvarende ikke-fortynnede prøver ved vurdering av virkningen av matrisen (urin) på resultatene av måling av proteinkonsentrasjonen ved sulfosalicylmetoden. For den endelige belysningen av effekten av matrisen på resultatene av sulfosalicylmetoden, er det nødvendig med forskning på et stort antall urinprøver.

Således indikerer de oppnådde data fordelene ved pyrogallolmetoden over sulfosalicylmetoden på grunn av dens høyere følsomhet og ikke-mottakelighet for forstyrrende faktorer, ikke behov for en blind urinprøve, muligheten for å bruke en standard for å konstruere en kalibreringskurve og en liten mengde urin for analyse. Tilstedeværelsen av slike egenskaper tillater oss å anbefale pyrogallolmetoden for utbredt bruk i laboratoriepraksis.

Fra dataene som er oppnådd, følger en konklusjon: Resultatene av måling av konsentrasjonen av protein i urinen ved sulfosalicylmetoden er ikke sammenlignbare med resultatene oppnådd ved pyrogallolmetoden. Dette faktum er svaret på spørsmålet - hvorfor laboratoriene i utviklede land ikke bruker sulfosalicylmetoden. Anvendelsen av denne metoden i underutviklede land er tilsynelatende forklart av det faktum at prisfaktoren hersker over nøyaktigheten og diagnostisk signifikans av de oppnådde resultater, og gitt tallene vist i fig. 3 resultater, det kan sies, og over sunn fornuft. Hvem trenger en slik analyse, når en proteinkonsentrasjon i urinen på 0,3 g / l kan måleresultatet være fra 0,05 til 0,25 g / l? Når det gjelder prisfaktoren, så, som du vet, betaler miseren to ganger. Feilfulle resultater av analysen fører til feilaktig diagnose og ineffektiv behandling av pasienten. Hovedfaren ved bruk av sulfosalicylmetoden er at vi får signifikant undervurderte verdier og ikke sjelden savner proteinuri. Derfor kan denne metoden ikke brukes selv for screening.

Så hva måler vi etter sulfosalicylmetoden? Metoden tilhører klassen turbidimetrisk, basert på måling av endringen i lysoverføring (D D) av reaksjonsblandingen på grunn av lysfordeling (turbiditet). Ved detektering av protein i urinen dannes turbiditet på grunn av følgende prosess: molekyler av urinproteiner i et surt medium blir denaturert, beveger seg fra en kompakt globulær form til en løs "filamentøs" form. Samtidig øker konglomeratdannelsens evne kraftig (utfellingsreaksjon) i proteiner. Individuelle proteinmolekyler er mindre enn bølgelengden av synlig lys og er derfor svært svakt scatter det. Spredningseffektiviteten øker dramatisk når størrelsen på de resulterende konglomerater av proteinmolekyler nærmer seg verdien av 0,6 μm (bølgelengden til probing light). Jo større konsentrasjonen av protein i urinen, desto større er antallet slike konglomerater (spredningssentre) dannet. Imidlertid er forholdet mellom den optiske tettheten D D målt på et fotometer og konsentrasjonen av protein i urinen svært kompleks. Ved det første trinn av reaksjonen dannes en viss mengde små proteinpartikler, da begynner de å holde seg sammen i større partikler, mens konsentrasjonen av spredningssentre reduseres, og effektiviteten (tverrsnitt) av spredning av hvert senter øker. På et gitt tidspunkt har vi i reaksjonsblandingen et visst antall spredningssentre med forskjellige størrelser. Ved høye konsentrasjoner av protein i urinen kan dannes store proteinpartikler som utfeller, noe som fører til en reduksjon i reaksjonsblandingens optiske tetthet.

Prosessen med denaturering av proteiner og reaksjonen av utfelling avhenger av sammensetningen av mediet hvor de forekommer (pH, konsentrasjon av forskjellige salter). For å kalibrere metoden bruker vi en vandig løsning av humant albumin med tilsetning av 0,9% natriumklorid. Når vi måler konsentrasjonen av protein i urinen, vet vi ikke og tar ikke hensyn til pH i urinen eller dens saltblanding. Vi tar heller ikke hensyn til det faktum at forskjellige proteiner reagerer forskjellig i sulfosalicylsyreoppløsningen. Dette forklarer den store spredning av måleresultatene som presenteres i fig. 3. Jo nærmere sammensetningen av urin til sammensetningen av kalibratoren, jo mer nøyaktig måleresultatet. Imidlertid er det svært få slike urinprøver. I de fleste tilfeller er sammensetningen av urinen slik at måleresultatene blir undervurdert og ofte ganske signifikante.

Sistnevnte er bekreftet ved eksperimentet beskrevet ovenfor, hvor proteinkonsentrasjonen ble målt ved sulfosalicylmetoden i ufortynnede og dobbelt fortynnede urinprøver. En sammenligning av de oppnådde dataene viste at fortynning av urin (med tanke på grad av fortynning) fører til en økning i resultatene av målinger av proteinkonsentrasjon med 15-33%. Dette faktum bekrefter den signifikante innflytelsen av urinsammensetningen på grunn av å bestemme konsentrasjonen av protein (matriseffekt).

Hvorfor pyrogallol metode tillater å få mer nøyaktige resultater av måling av konsentrasjonen av protein i urinen? For det første, på grunn av større mengde fortynning av urinprøver i reaksjonsblandingen. Hvis i sulfosalicylmetoden er forholdet mellom urinprøve og reagens 1/3, så kan det i pyrogallolmetoden ligge i området fra 1/12,5 til 1/60, avhengig av varianten av teknikken, noe som signifikant reduserer effekten av urinpreparat på måleresultatet. For det andre går reaksjonen i succinatbuffer, det vil si ved en stabil pH. Og til slutt, selve prinsippet om metoden, hvis det kan sies så, er mer gjennomsiktig. Natriummolybdat og pyrogallol rødt fargestoff danner et kompleks med et proteinmolekyl. Dette fører til det faktum at fargemolekylene, i en fri tilstand, ikke absorberer lys ved en bølgelengde på 600 nm, i kombinasjon med et protein, absorberer lys. Således virker vi å markere hvert proteinmolekyl med et fargestoff og som et resultat finner vi at endringen i den optiske densitet av reaksjonsblandingen ved en bølgelengde på 600 nm er unikt relatert til proteinkonsentrasjonen i urinen.

Som en konklusjon presenteres de mest signifikante forskjellene mellom sulfosalicylmetoden for å bestemme proteinet i urinen og metoden ved bruk av det pyrogallol-røde fargestoffet i tabell nr. 1.

Tab. Nr. 1. Sammenligningsegenskaper ved to metoder for å bestemme protein i urinen (sulfosalicyl- og pyrogallol-metoder)

Bestemmelse av urinprotein med pyrogallol rødt

Prinsippet for metoden er basert på fotometrisk måling av den optiske tetthet av en oppløsning av et fargekompleks dannet ved samspillet mellom proteinmolekyler med molekyler av det pyrogallol-røde fargekomplekset og natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks) i et surt medium. Fargeintensiteten til løsningen er proporsjonal med proteininnholdet i materialet som er studert. Nærværet av vaskemidler i reagenset gir en ekvivalent definisjon av proteiner av forskjellig natur og struktur.

Reagenser. 1) 1,5 mmol / l oppløsning av pyrogallolrød (PGA): 60 mg PGA oppløses i 100 ml metanol. Oppbevares ved temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / l succinatbufferløsning pH 2,5: 5,9 g ravsyre (HOOC-CH₂CH₂-COOH); 0,14 g natriumoksalat (Na₂C₂O₄) og 0,5 g natriumbenzoat (C₆H₅COONa) oppløses i 900 ml destillert vann; 3) 10 mmol / l oppløsning av natriummolybdat-krystallhydrat (Na₂MoO₄ × 2H₂O): 240 mg natriummolybdat oppløses i 100 ml destillert vann; 4) Arbeidsreagens: Til 900 ml succinatbufferoppløsning tilsätt 40 ml av oppløsningen av PHC og 4 ml natriummolybdatoppløsning. Oppløsningens pH er justert til 2,5 med en 0,1 mol / l løsning av saltsyre (HCl) og volumet justeres til 1 l. Reagenset i denne formen er klar til bruk og er stabilt ved oppbevaring på et mørkt sted og ved en temperatur på 2-25 ° C i 6 måneder; 5) 0,5 g / l standard albuminløsning.

Forutsetningen. 0,05 ml av den studerte urinen blir introdusert i det første testrøret, 0,05 ml albuminstandardoppløsning tilsettes til det andre testrøret og 0,05 ml destillert vann til det tredje reagensrøret (kontrollprøve), og deretter tilsettes 3 ml arbeidsreagens til disse reagensrørene. Innholdet i rørene blandes og etter 10 minutter blir prøven og standarden fotomettet mot en kontrollprøve ved en bølgelengde på 596 nm i en kuvette med en optisk bane lengde på 10 mm.

Beregningen av proteinkonsentrasjonen i den analyserte urinprøven utføres i henhold til formelen:

hvor C er proteinkonsentrasjonen i den analyserte urinprøven, g / l; En_etc. og a_Artikkel- utryddelse av den studerte urinprøven og standard albuminløsning, g / l; 0,5 - konsentrasjon av standard albuminløsning, g / l.

• fargen på løsningen (fargekompleks) er stabil i en time;
• direkte proporsjonal forhold mellom konsentrasjonen av protein i prøven og absorpsjonen av løsningen avhenger av typen fotometer;
• Når proteininnholdet i urinen er over 3 g / l, blir prøven fortynnet med isotonisk natriumkloridoppløsning (9 g / l) og bestemmelsen gjentas. Graden av fortynning tas i betraktning ved bestemmelse av proteinkonsentrasjonen.

Vi behandler leveren

Behandling, symptomer, narkotika

Pyrogallol rødt bestemmelse av protein i urinen

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Normalt utskilles proteinet i urinen i en relativt liten mengde, vanligvis ikke mer enn 100-150 mg / dag.

Daglig diurese hos en sunn person er 1000-1500 ml / dag; proteinkonsentrasjonen under fysiologiske forhold er således 8-10 mg / dl (0,08-0,1 g / l).

Totalt urinprotein er representert av tre hovedfraksjoner - albumin, mukoproteiner og globuliner.

Urinalbumin er den delen av serumalbumin som har blitt filtrert i glomeruli og har ikke blitt reabsorbert i nyre-tubuli; Ved normal utskillelse av albumin i urinen er mindre enn 30 mg / dag. En annen viktig kilde til protein i urinen er nyretubuli, spesielt den distale delen av tubulene. Disse rørene utskiller to tredjedeler av den totale mengden urinprotein; av dette beløpet er omtrent 50% representert av Tamm-Horsfall-glykoproteinet, som utskilles av epitelet av distale tubuli og spiller en viktig rolle i dannelsen av urinstein. Andre proteiner er tilstede i urinen i små mengder, og kommer fra lavmolekylære plasmaproteiner filtrert gjennom nyretilfiltret, som ikke reabsorberes i nyre-tubuli, mikroglobuliner fra epitelet av nyretubuli (RTE), samt prostatisk og vaginal utslipp.

Proteinuri, det vil si en økning i proteininnholdet i urinen, er en av de mest signifikante symptomene, noe som reflekterer nyreskade. Imidlertid kan en rekke andre forhold også ledsages av proteinuri. Derfor er det to hovedgrupper av proteinuri: nyre (ekte) og extrarenal (falsk) proteinuri.

I renal proteinuri kommer proteinet i urinen direkte fra blodet på grunn av en økning i permeabiliteten til glomerulærfiltret. Renal proteinuri er ofte funnet i glomerulonephritis, nephrosis, pyelonefrit, nephrosclerosis, nyreamyloidose, ulike former for nephropati, for eksempel nefropati av gravide kvinner, feber, hypertensjon, etc. Proteinuri kan også bli funnet hos friske mennesker etter alvorlig fysisk anstrengelse, hypotermi og psykisk stress. Hos nyfødte er det observert fysiologisk proteinuri i de første ukene av livet, og når astheni forekommer hos barn og ungdom, er ortostatisk proteinuri (i kroppens oppreist stilling) mulig i kombinasjon med rask vekst mellom 7 og 18 år.

I tilfelle av falsk (extrarenal) proteinuri, er kilden til protein i urinen en blanding av leukocytter, erytrocytter, epitelceller i urinveiene urothelia. Forfallet av disse elementene, spesielt uttalt med alkalisk urin, fører til inngrep av protein i urin, som allerede har passert nyretilfiltret. Spesielt høy grad av falsk proteinuri gir blod i urinen, med stor hematuri, den kan nå 30 g / l og mer. Sykdommer som kan være ledsaget av ekstrarenal proteinuri - urolithiasis, nyre tuberkulose, nyre eller urinveis tumorer, cystitis, pyelitt, prostatitt, urethrit, vulvovaginitt.

Klinisk klassifisering inkluderer mild proteinuri (mindre enn 0,5 g / dag.), Moderat (fra 0,5 til 4 g / dag.), Eller alvorlig (mer enn 4 g / dag.).

De fleste pasienter med nyresykdom, som akutt glomerulonefrit eller pyelonefrit, avslører moderat proteinuri, men pasienter med nefrotisk syndrom utskiller vanligvis mer enn 4 g protein i urin daglig.

For kvantitativ bestemmelse av protein brukes en rekke metoder, spesielt den samlede Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden, biuretmetoden, sulfosalicylsyremetoden, metodene som bruker Coomassie-blå fargestoff, pyrogallol-rød fargestoff, etc.

Bruken av ulike metoder for å bestemme protein i urinen har ført til en alvorlig forvirring i tolkningen av grensene for normen for proteininnhold i urinen. Siden 2 metoder er mest brukt i laboratorier - med sulfosalicylsyre og pyrogallol rød fargestoff, vurderer vi problemet med korrektheten av grensene for normer for dem. Fra synet av sulfosalicylmetoden i normal urin, bør proteininnholdet ikke overstige 0,03 g / l, og fra pyrogallol, 0,1 g / l! Forskjellene er trefoldige.

Lave verdier av normal konsentrasjon av proteiner i urinen ved bruk av sulfosalicylsyre på grunn av følgende punkter:

• Kalibreringskurven er basert på en vandig løsning av albumin. Urin i sammensetningen er svært forskjellig fra vann: pH, salt, lavmolekylære forbindelser (kreatinin, urea, etc.). Som et resultat, ifølge Altshuler, Rakov og Tkachev, kan en feil ved å bestemme urinprotein være 3 ganger eller mer! dvs. korrekte resultater kan kun oppnås i tilfeller hvor urinen har en svært lav spesifisitet og dens sammensetning og pH nærmer seg vann;
• Den høyere sensitiviteten til sulfosalicylmetoden til albumin i sammenligning med andre proteiner (på den tiden, som nevnt ovenfor, er albumin i normale urinprøver ikke mer enn 30% av det totale urinproteinet);
• Hvis urin-pH-verdien skiftes til alkalisk side, blir sulfosalicylsyre nøytralisert, noe som også medfører en reduksjon i resultatene av proteinbestemmelse;
• sedimenteringshastigheten av utfelter er gjenstand for betydelig variasjon - ved lave proteinkonsentrasjoner blir nedbør senket, og tidlig avslutning av reaksjonen fører til et underestimat av resultatet;
• frekvensen av utfellingsreaksjon avhenger i hovedsak av blanding av reaksjonsblandingen. Ved høye konsentrasjoner av protein kan kraftig risting av røret føre til dannelse av store flak og deres hurtige nedbør.

Alle de ovenfor angitte egenskapene i metoden fører til en signifikant undervurdering av proteinkonsentrasjonen som er bestemt i urinen. Graden av underrapportering avhenger sterkt av sammensetningen av en bestemt urinprøve. Siden metoden for sulfosalicylsyre gir en undervurdert verdi av proteinkonsentrasjon, er normalgrensen for denne metoden også 0,03 g / l, omtrent tre ganger for lav i sammenligning med dataene gitt i utenlandske referansebøker på klinisk laboratoriediagnostikk.

De aller fleste laboratorier i vestlige land har forlatt bruken av sulfosalicylmetoden for å bestemme konsentrasjonen av protein i urinen og aktivt bruke pyrogallolmetoden til dette formålet. Pyrogallol-metoden for å bestemme proteinkonsentrasjonen i urin og andre biologiske væsker er basert på det fotometriske prinsippet om måling av den optiske tettheten av et fargekompleks dannet ved samspillet mellom proteinmolekyler med pyrogallol-rødt fargestoffer og natriummolybdatkompleksmolekyler (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks).

Hvorfor pyrogallol metode tillater å få mer nøyaktige resultater av måling av konsentrasjonen av protein i urinen? For det første, på grunn av større mengde fortynning av urinprøver i reaksjonsblandingen. Hvis i sulfosalicylmetoden er forholdet mellom urinprøve og reagens 1/3, så kan det i pyrogallolmetoden ligge i området fra 1/12,5 til 1/60, avhengig av varianten av teknikken, noe som signifikant reduserer effekten av urinpreparat på måleresultatet. For det andre går reaksjonen i succinatbuffer, det vil si ved en stabil pH. Og til slutt kan selve prinsippet om metoden sies å være mer "gjennomsiktig". Natriummolybdat og pyrogallol rødt fargestoff danner et kompleks med et proteinmolekyl. Dette fører til at fargemolekylene i fri tilstand som ikke absorberer lys ved en bølgelengde på 600 nm i kombinasjon med et proteinabsorbentlys. Således virker vi å markere hvert proteinmolekyl med et fargestoff, og som et resultat ser vi at endringen i den optiske densitet av reaksjonsblandingen ved en bølgelengde på 600 nm klart korrelerer med proteinkonsentrasjonen i urinen. Dessuten, siden affiniteten av pyrogallol rødt til forskjellige proteinfraksjoner er nesten det samme, tillater metoden å bestemme totalt urinprotein. Derfor er grensen for normale verdier for proteinkonsentrasjon i urinen 0,1 g / l (det er angitt i alle moderne vestlige retningslinjer for klinisk og laboratoriediagnostikk, inkludert klinisk manual for laboratorietester, redigert av N. Tits). Sammenligningsegenskaper for pyrogallol og sulfosalicylmetoder for å bestemme urinprotein er presentert i tabell 1.

Til slutt vil jeg gjerne igjen fokusere på at når laboratoriet går fra sulfosalicylmetoden for å bestemme urinproteinet til pyrogallolmetoden, øker grensen for normale verdier betydelig (fra 0,03 g / l til 0,1 g / l!). Dette laboratoriepersonalet bør absolutt varsle klinikere fordi I denne situasjonen kan diagnosen proteinuria bare gjøres dersom proteininnholdet i urinen overskrider 0,1 g / l.

3. Bestemmelse av protein.

Prinsipp for metoden basert på koagulering av protein i urinen i nærvær av salpetersyre (eller 20% oppløsning av sulfosalicylsyre).

Arbeidsutvikling: til 5 dråper urin tilsatt 1-2 dråper salpetersyre (eller sulfosalicylsyre). I nærvær av protein i urinen, oppstår grumlighet.

Tabell. Påvisning av patologiske komponenter i urinen.

Merk: i nærvær av glukose og protein i undersøkt urin, bestemmes deres kvantitative innhold.

Kvantitativ bestemmelse av protein i urinen ved kolorimetrisk metode med pyrogallolrød.

Prinsipp for metoden: Når protein interagerer med pyrogallol rødt og natriummolybdat, dannes et farget kompleks, fargestyrken, som er proporsjonal med konsentrasjonen av protein i prøven.

reagenser: Arbeidsreagens - pyrogallol rød løsning i succinatbuffer, kalibreringsproteinløsning med en konsentrasjon på 0,50 g / l

Prøver blandes, hold i 10 minutter. ved romtemperatur (18-25 ° C). Mål opplevd optisk tetthet (D_op) og kalibreringsprøve (D_til) mot kontrollprøven ved A = 598 (578-610) nm. Farging er stabil i 1 time.

beregning: Konsentrasjonen av protein i urinen (C) g / l beregnes med formelen:

Normale verdier: opptil 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Kvantitativ bestemmelse av glukose i urinen ved glukoseoksydasemetoden.

Prinsipp for metoden: Når D-glukose oksyderes ved atmosfærisk oksygen under virkningen av glukoseoksidase, dannes en ekvimolær mengde hydrogenperoksid. Under virkningen av peroksidase oksyderer hydrogenperoksid kromatogene substrater (en blanding av fenol og 4 aminoantipirin - 4AAP) med dannelsen av et farget produkt. Fargens intensitet er proporsjonal med glukoseinnholdet.

2 N₂Oh₂ + fenol + 4AA-fargede forbindelser + 4N₂Oh

Arbeidsutvikling: 1 ml arbeidsløsning og 0,5 ml fosfatbuffer innføres i to rør. 0,02 ml urin blir tilsatt til det første røret, og 0,02 ml av kalibratoren blir tilsatt til den andre (kalibreringsglukose standardløsning, 10 mmol / l). Prøvene blandes, inkuberes i 15 minutter ved en temperatur på 37 ° C i en termostat, og den optiske tettheten måles ved eksperimentell (D_op) og kalibrering (D_til) prøver mot arbeidsreagenset ved en bølgelengde på 500-546 nm.

Innholdet av glukose i daglig urin bestemmes av mmol / dag ved å multiplisere resultatet oppnådd av volumet av oppsamlet urin per dag.

Merk. Når sukkerinnholdet i urinen mer enn 1% må fortynnes.

For tiden bruker biokjemiske laboratorier en enhetlig ekspressmetode for å analysere urin for glukose ved å bruke reaksjonell glukose-testglukosetest eller ved hjelp av kombinerte teststrimler for pH, protein, glukose, ketonlegemer og blod. Teststrimler, nedsenket i et kar med urin i 1 sekund. og sammenlign fargen på skalaen.

Doktor Hepatitt

leverbehandling

Norm protein i urin pyrogallol metode

En sunn person produserer 1,0-1,5 liter urin per dag. Et innhold på 8-10 mg / dl protein i det er et fysiologisk fenomen. Det daglige inntaket av protein i urinen 100-150 mg skal ikke forårsake mistanke. Globulin, mukoprotein og albumin er det som smelter totalt protein i urinen. En stor albuminutstrømning indikerer et brudd på filtreringsprosessen i nyrene og kalles proteinuri eller albuminuri.

Hver substans i urinen er gitt en "sunn" hastighet, og hvis proteinindeksen svinger, kan dette indikere en patologi av nyrene.

Urinalyse innebærer bruk av enten den første (morgen) delen, eller ta en daglig prøve. Sistnevnte foretrekker å vurdere proteinuriens nivå, siden proteininnholdet har uttalt daglige svingninger. Urin i løpet av dagen samles i en beholder, måler totalvolumet. For et laboratorium som utfører urinproteinanalyse, er en standardprøve (fra 50 til 100 ml) fra denne beholderen tilstrekkelig, resten er ikke nødvendig. For mer informasjon, utføres en ekstra test på Zimnitsky, som viser om urinindikatorene per dag er normale.

Tilbake til innholdsfortegnelsen

Proteinet i urinen er normalt hos en voksen bør ikke overstige 0,033 g / l. Samtidig er dagsprisen ikke høyere enn 0,05 g / l. For gravide kvinner er proteinproteinen i daglig urin mer - 0,3 g / l. Og om morgenen er urinen det samme - 0,033 g / l. Proteinstandardene er forskjellige i den generelle analysen av urin og hos barn: 0,036 g / l for morgendelen og 0,06 g / l per dag. Ofte utfører laboratorier en analyse ved hjelp av to metoder, som viser hvor mye proteinfraksjon som finnes i urinen. Ovennevnte normale verdier gjelder for analysen utført med sulfosalicylsyre. Hvis pyrogallol rød fargestoff ble brukt, vil verdiene være tre ganger forskjellige.

Tilbake til innholdsfortegnelsen

Årsaken til protein i urinen kan være patologiske prosesser i nyrene:

• filtrering i nyreglomeruli går feil vei;
• absorpsjon i proteinrør er nedsatt;
• Noen sykdommer har en sterk belastning på nyrene - når proteinet i blodet er forhøyet, har nyrene rett og slett ikke tid til å filtrere det.

De øvrige grunnene anses å være ikke-nyre. Slik utvikler funksjonell albuminuri. Proteinet i analysen av urin vises i allergiske reaksjoner, epilepsi, hjertesvikt, leukemi, forgiftning, myelom, kjemoterapi, systemiske sykdommer. Oftest vil denne indikatoren i pasientanalyser være den første klokken av hypertensiv sykdom.

En økning i urinprotein kan skyldes faktorer med en ikke-patologisk karakter, derfor vil det bli nødvendig med ytterligere analyser. Gå tilbake til innholdsfortegnelsen

Kvantitative metoder for å bestemme protein i urinen gir feil, derfor anbefales det å utføre flere analyser, og deretter bruke formelen til å beregne riktig verdi. Urinproteininnholdet måles i g / l eller mg / l. Disse indikatorene på protein gjør det mulig å bestemme nivået av proteinuri, foreslå en grunn, evaluere prognosen og bestemme strategien.

Tilbake til innholdsfortegnelsen

For kroppens fulle funksjon krever en konstant utveksling mellom blod og vev. Det er bare mulig hvis det er et visst osmotisk trykk i blodkarene. Blodplasmaproteiner opprettholder bare et slikt trykknivå når lavmolekylære stoffer lett passerer fra mediet med høy konsentrasjon til mediet med den lavere konsentrasjon. Tapet av proteinmolekyler fører til frigjøring av blod fra sengen i vevet, som er full av sterkt ødem. Dette er manifestasjonen av moderat og alvorlig proteinuri.

De første stadiene av albuminuri er asymptomatiske. Pasienten tar kun hensyn til manifestasjonene av den underliggende sykdommen, som er årsaken til protein i urinen.

Sporproteinuri kalles en økning i proteininnholdet i urinen på grunn av bruken av visse produkter. Gå tilbake til innholdsfortegnelsen

Urin for analyse samles i en ren, skummet beholder. Før du oppsamler toalettet, må du vaske med såpe og vann. Kvinner anbefales å lukke skjeden med et stykke bomull eller en tampong slik at vaginal utslipp ikke påvirker resultatet. På elva er det bedre å ikke drikke alkohol, mineralvann, kaffe, krydret, salt og mat som gir urin en farge (blåbær, rødbeter). Sterk fysisk anstrengelse, lang spasertur, stress, feber og svette, overdreven forbruk av proteinmatvarer eller medisiner før du får urin til å provosere utseendet av protein i urinanalysen av en helt frisk person. Dette tillatte fenomenet kalles spor proteinuri.

Tilbake til innholdsfortegnelsen

Nyresykdom som fører til tap av protein:

• Amyloidose. Normale celler i nyrene erstattes av amyloider (protein-sakkaridkompleks), som forhindrer kroppen i å jobbe normalt. Ved proteinurisk stadium deponeres amyloider i nyrene, ødelegger nephronen og som et resultat nyrene filteret. Så proteinet kommer fra blodet inn i urinen. Dette stadiet kan vare mer enn 10 år.
• Diabetisk nefropati. På grunn av feil metabolisme av karbohydrater og lipider, blir blodkar, glomeruli og tubuli i nyrene ødelagt. Protein i urinen er det første tegn på en forventet komplikasjon av diabetes.
• Sykdommer av inflammatorisk genese - nephritis. Vanligvis påvirker lesjonene blodkarrene, glomeruli og pyelokalisale systemet, forstyrrer det normale løpet av filtreringssystemet.
• Glomerulonephritis er i de fleste tilfeller av autoimmun natur. Pasienten klager over en nedgang i mengden urin, smerter i rygg og en økning i trykk. For behandling av glomerulonephritis anbefaler diett, diett og legemiddelbehandling.
• Pyelonefritt. I den akutte perioden oppstår symptomer på bakteriell infeksjon: kuldegysninger, kvalme, hodepine. Dette er en smittsom sykdom.
• Polycystisk nyresykdom.

I en sunn kropp er proteinmolekyler (og de er ganske store i størrelse) ikke i stand til å passere gjennom nyrens filtreringssystem. Derfor bør protein i urinen ikke være. Denne indikatoren er den samme for både menn og kvinner. Hvis analysen indikerer proteinuri, er det viktig å konsultere en lege av grunner. Spesialisten vil estimere hvor mye proteinnivået er forhøyet, om det er en sammenhengende patologi, hvordan å gjenopprette kroppens normale funksjon. Ifølge statistikk har kvinner høyere risiko for urogenitale sykdommer enn menn.

Prinsipp for metoden basert på koagulering av protein i urinen i nærvær av salpetersyre (eller 20% oppløsning av sulfosalicylsyre).

Arbeidsutvikling: til 5 dråper urin tilsatt 1-2 dråper salpetersyre (eller sulfosalicylsyre). I nærvær av protein i urinen, oppstår grumlighet.

Tabell. Påvisning av patologiske komponenter i urinen.

Merk: i nærvær av glukose og protein i undersøkt urin, bestemmes deres kvantitative innhold.

Prinsipp for metoden: Når protein interagerer med pyrogallol rødt og natriummolybdat, dannes et farget kompleks, fargestyrken, som er proporsjonal med konsentrasjonen av protein i prøven.

reagenser: Arbeidsreagens - pyrogallol rød løsning i succinatbuffer, kalibreringsproteinløsning med en konsentrasjon på 0,50 g / l

Prøver blandes, hold i 10 minutter. ved romtemperatur (18-25 ° C). Mål den optiske tettheten til eksperimentell (Dop) og kalibreringsprøven (Dk) mot kontrollprøven ved λ = 598 (578-610) nm. Farging er stabil i 1 time.

beregning: Konsentrasjonen av protein i urinen (C) g / l beregnes med formelen:

hvor: Dop = Dk = C = g / l.

Normale verdier: opptil 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Prinsipp for metoden: Når D-glukose oksyderes ved atmosfærisk oksygen under virkningen av glukoseoksidase, dannes en ekvimolær mengde hydrogenperoksid. Under virkningen av peroksidase oksyderer hydrogenperoksid kromatogene substrater (en blanding av fenol og 4 aminoantipirin - 4AAP) med dannelsen av et farget produkt. Fargens intensitet er proporsjonal med glukoseinnholdet.

Glukose + O2 + H2O glukonolakton + H2O2

2H2O2 + fenol + 4AAP farget forbindelse + 4H20

Arbeidsutvikling: 1 ml arbeidsløsning og 0,5 ml fosfatbuffer innføres i to rør. 0,02 ml urin blir tilsatt til det første røret, og 0,02 ml av kalibratoren blir tilsatt til den andre (kalibreringsglukose standardløsning, 10 mmol / l). Prøven blandes, inkuberes i 15 minutter ved en temperatur på 37 ° C i en termostat, og den optiske densitet av eksperimentelle (Dop) og kalibrerings (Dk) prøver mot arbeidsreagenset blir målt ved en bølgelengde på 500-546 nm.

Beregning: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Innholdet av glukose i daglig urin bestemmes av mmol / dag ved å multiplisere resultatet oppnådd av volumet av oppsamlet urin per dag.

Merk. Når sukkerinnholdet i urinen mer enn 1% må fortynnes.

For tiden bruker biokjemiske laboratorier en enhetlig ekspressmetode for å analysere urin for glukose ved å bruke reaksjonell glukose-testglukosetest eller ved hjelp av kombinerte teststrimler for pH, protein, glukose, ketonlegemer og blod. Teststrimler, nedsenket i et kar med urin i 1 sekund. og sammenlign fargen på skalaen.

Bestemmelse av protein ved bruk av pyrogallol rød indikator

Prinsippet for metoden er basert på fotometrisk måling av den optiske tetthet av en oppløsning av et fargekompleks dannet ved samspillet mellom proteinmolekyler med molekyler av det pyrogallol-røde fargekomplekset og natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-kompleks) i et surt medium. Fargeintensiteten til løsningen er proporsjonal med proteininnholdet i materialet som er studert. Nærværet av vaskemidler i reagenset gir en ekvivalent definisjon av proteiner av forskjellig natur og struktur.

Reagenser. 1) 1,5 mmol / l oppløsning av pyrogallolrød (PGA): 60 mg PGA oppløses i 100 ml metanol. Oppbevares ved temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / l succinatbufferløsning pH 2,5: 5,9 g ravsyre (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g natriumoksalat (Na2C204) og 0,5 g natriumbenzoat (C6H5COONa) oppløses i 900 ml destillert vann; 3) 10 mmol / l natriummolybdat-krystallhydratoppløsning (Na2MoO4x 2H2O): 240 mg natriummolybdat oppløses i 100 ml destillert vann; 4) Arbeidsreagens: Til 900 ml succinatbufferoppløsning tilsätt 40 ml av oppløsningen av PHC og 4 ml natriummolybdatoppløsning. Oppløsningens pH er justert til 2,5 med en 0,1 mol / l løsning av saltsyre (HCl) og volumet justeres til 1 l. Reagenset i denne formen er klar til bruk og er stabilt ved oppbevaring på et mørkt sted og ved en temperatur på 2-25 ° C i 6 måneder; 5) 0,5 g / l standard albuminløsning.

Forutsetningen. 0,05 ml av den studerte urinen blir introdusert i det første testrøret, 0,05 ml albuminstandardoppløsning tilsettes til det andre testrøret og 0,05 ml destillert vann til det tredje reagensrøret (kontrollprøve), og deretter tilsettes 3 ml arbeidsreagens til disse reagensrørene. Innholdet i rørene blandes og etter 10 minutter blir prøven og standarden fotomettet mot en kontrollprøve ved en bølgelengde på 596 nm i en kuvette med en optisk bane lengde på 10 mm.

Beregningen av proteinkonsentrasjonen i den analyserte urinprøven utføres i henhold til formelen:

C = 0,5 × apr / ast,

hvor C er proteinkonsentrasjonen i den analyserte urinprøven, g / l; Apr og Ast - utryddelse av undersøkt urinprøve og standard albuminløsning, g / l; 0,5 - konsentrasjon av standard albuminløsning, g / l.

• fargen på løsningen (fargekompleks) er stabil i en time;
• direkte proporsjonal forhold mellom konsentrasjonen av protein i prøven og absorpsjonen av løsningen avhenger av typen fotometer;
• Når proteininnholdet i urinen er over 3 g / l, blir prøven fortynnet med isotonisk natriumkloridoppløsning (9 g / l) og bestemmelsen gjentas. Graden av fortynning tas i betraktning ved bestemmelse av proteinkonsentrasjonen.

• Bestemmelse av urinprotein
• Unified Sulfosalicylic Acid Trial
• Den Unified Brandberg - Roberts - Stolnikov Metoden
• Bestemme mengden protein i urinen ved reaksjon med sulfosalicylsyre
• Biuret metode
• Deteksjon i urin av Bens - Jones protein

Proteinuri er et fenomen der protein oppdages i urin, noe som indikerer muligheten for nyreskade, og er en faktor i utviklingen av hjerte-, blod- og lymfatiske sykdommer.

Deteksjon av protein i urinen indikerer ikke alltid en sykdom. Et lignende fenomen er typisk selv for helt friske mennesker, i hvis urinprotein kan detekteres. Hypotermi, fysisk anstrengelse, forbruk av protein matvarer fører til utseendet av protein i urinen, som forsvinner uten behandling.

På screeningstidspunktet bestemmer 17% av friske mennesker protein, men kun 2% av dette antallet viser et positivt testresultat som tegn på nyresykdom.

Proteinmolekyler bør ikke komme inn i blodet. De er avgjørende for kroppen - de er et byggemateriale for celler, deltar i reaksjoner som koenzymer, hormoner, antistoffer. I både menn og kvinner er frekvensen det totale fraværet av protein i urinen.

Funksjonen for å forhindre tap av proteinmolekyler av kroppen utføres av nyrene.

To nyresystemer er involvert i filtrering av urin:

1. glomeruli - ikke la inn store molekyler, men hold ikke albumin, globuliner - en liten brøkdel av proteinmolekyler;
2. nyretubuli - adsorbproteiner filtrerte glomeruli, tilbake til sirkulasjonssystemet.

Albumin (ca. 49%), mukoproteiner, globuliner finnes i urinen, hvor andel av immunoglobuliner står for om lag 20%.

Globuliner - myseproteiner med høy molekylvekt, som produseres i immunsystemet og leveren. De fleste av dem er syntetisert av immunsystemet, refererer til immunoglobuliner eller antistoffer.

Albuminer er en brøkdel av proteiner som først vises i urinen, selv med mindre nyreskade. Det er en viss mengde albumin i sunn urin, men det er så ubetydelig at det ikke kan detekteres ved hjelp av laboratoriediagnostikk.

Den nedre terskelen som kan detekteres ved hjelp av laboratoriediagnostikk er 0,033 g / l. Hvis mer enn 150 mg protein går tapt per dag, snakker de om proteinuri.

Grunnleggende urinprotein data

Sykdommen med mild proteinuri er asymptomatisk. Visuelt kan proteinfri urin ikke skilles fra urin, der det er en liten mengde protein. Noe skumholdig urin blir allerede med en høy grad av proteinuri.

Det er mulig å påta seg en aktiv utskillelse av protein i urinen ved pasientens utseende bare med en moderat eller alvorlig grad av sykdommen på grunn av utseende av ødem i lemmer, ansikt, underliv.

I de tidlige stadiene av sykdommen kan følgende være indirekte tegn på proteinuri:

• urin misfarging;
• økende svakhet;
• mangel på appetitt;
• kvalme, oppkast;
• bein smerte;
• døsighet, svimmelhet;
• forhøyet temperatur.

Utseendet til slike tegn kan ikke ignoreres, spesielt under graviditet. Dette kan bety en liten avvik fra normen, og kan være et symptom på å utvikle preeklampsi, preeklampsi.

Kvantifisering av tap av protein er ikke en lett oppgave, for å få et mer komplett bilde av pasientens tilstand, brukes flere laboratorietester.

Vanskeligheter ved å velge en metode for å oppdage overskytende protein i urinen, forklares ved:

• lavproteinkonsentrasjon, for hvilken anerkjennelse krever høyt presisjonsinstrumenter;
• sammensetning av urin, kompliserer oppgaven, da den inneholder stoffer som forvrenger resultatet.

Den største informasjonen er gitt ved analysen av den første morgendelen av urin, som oppsamles etter oppvåkning.

På forsiden av analysen må følgende betingelser være oppfylt:

• Ikke spis krydret, stekt, proteinmat, alkohol;
• utelukkende vanndrivende i 48 timer;
• begrense fysisk aktivitet
• følg nøye med regler om personlig hygiene.

Morgen urin er den mest informative, som det er langsiktig i blæren, mindre avhengig av matinntak.

Mengden protein i urinen kan analyseres ved tilfeldig del, som tas når som helst, men denne analysen er mindre informativ, jo større er sannsynligheten for feil.

For å kvantifisere daglig protein tap, er en analyse av totalt daglig urin gjort. For å gjøre dette, innen 24 timer samlet inn i en spesiell plastbeholder, ble all urinen allokert for dagen. Du kan begynne å samle når som helst. Hovedbetingelsen - akkurat dagen for innsamling.

Den kvalitative definisjonen av proteinuri er basert på denaturering av proteinet ved fysiske eller kjemiske faktorer. Kvalitative metoder relaterer seg til screening, noe som gjør det mulig å fastslå tilstedeværelsen av protein i urinen, men ikke gi mulighet til å nøyaktig vurdere graden av proteinuri.

Brukte prøver:

• med kokende;
• sulfosalicylsyre;
• salpetersyre, reagens Larionic ved Heller-ringprøven.

En prøve med sulfosalicylsyre utføres ved å sammenligne en kontroll urinprøve med en erfaren, hvor 7-8 dråper 20% sulfosalicylsyre blir tilsatt til urinen. Konklusjonen om tilstedeværelsen av proteinet er laget i henhold til intensiteten av den opaliserende turbiditeten som opptrer i reagensrøret under reaksjonen.

Mer vanlig Geller test med 50% salpetersyre. Sensitiviteten til metoden er 0,033 g / l. Med en slik konsentrasjon av protein i et reagensrør med en urinprøve og reagens i 2-3 minutter etter forsøkets start, vises en hvit trådring, hvor dannelsen av disse indikerer tilstedeværelsen av protein.

Semikvantitative metoder inkluderer:

• Metode for å bestemme protein i urinteststrimmene;
• Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden.

Metoden for bestemmelse i henhold til Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden er basert på Geller-ringsmetoden, men tillater en til å nøyaktig estimere mengden protein. Ved utførelse av en test ved hjelp av denne teknikken oppnår flere fortynninger av urin utseendet på en trådlignende proteinring i tidsintervallet 2-3 minutter fra begynnelsen av testen.

I praksis brukes teststrimmelmetoden med den påførte fargestoffbromfenolblå som indikator. Ulempen med teststrimler er selektiv følsomhet overfor albumin, noe som fører til en forvrengning av resultatet i tilfelle en økning i urinkonsentrasjonen av globuliner eller andre proteiner.

Ulempene ved fremgangsmåten er også relativt lav følsomhet av testen til proteinet. Teststrimmene begynner å reagere på nærvær av protein i urinen ved en proteinkonsentrasjon større enn 0,15 g / l.

Kvantitative vurderingsmetoder kan deles betinget inn i:

Metoder er basert på egenskapen til proteiner for å redusere løseligheten under virkningen av et bindemiddel med dannelsen av en dårlig oppløselig forbindelse.

Agenter som forårsaker proteinbinding, kan være:

• sulfosalicylsyre;
• trikloreddiksyre;
• benzetoniumklorid.

På resultatene av testene er det trukket konklusjoner basert på graden av demping av lysstrømmen i prøven med suspensjon i forhold til kontrollen. Resultatene av denne metoden kan ikke alltid tilskrives pålitelig på grunn av forskjellene i betingelsene for: hastigheten på blanding av reaktantene, temperatur, surhet av mediet.

Effekten på evalueringen av medisininntaket dagen før, før det utføres tester ved bruk av disse metodene, kan ikke tas:

• antibiotika;
• sulfonamider;
• jodholdige legemidler.

Metoden refererer til tilgjengelig til kost, noe som gjør det mulig å bli mye brukt til screening. Men mer nøyaktige resultater kan oppnås ved å bruke dyrere kolorimetriske teknikker.

Sensitive metoder som nøyaktig bestemmer konsentrasjonen av protein i urinen, inkluderer kolorimetriske metoder.

Du kan gjøre det med høy presisjon:

• biuretreaksjon;
• teknikk Lowry;
• Fargeteknikker som bruker fargestoffer som danner komplekser med urinproteiner som avviger fra prøven visuelt.

Colorimetriske metoder for å påvise protein i urinen

Metoden refererer til en pålitelig, svært sensitiv, som gjør det mulig å bestemme i urinalbuminet, globuliner, paraproteiner. Den brukes som hovedmetode for å klargjøre kontroversielle testresultater, så vel som det daglige urinproteinet hos pasienter med nevrologiske avdelinger på sykehus.

Enda mer nøyaktige resultater kan oppnås med Lowry-metoden, som er basert på biuretreaksjonen, så vel som Folin-reaksjonen, som gjenkjenner tryptofan og tyrosin i proteinmolekyler.

For å eliminere mulige feil blir urinprøven renset ved dialyse fra aminosyrer, urinsyre. Feil er mulig ved bruk av salicylater, tetracykliner, klorpromazin.

Den mest nøyaktige metoden for å bestemme et protein er basert på egenskapen til å binde til fargestoffene som brukes:

• ponceau;
• Coomassie briljant blå;
• pyrogallisk rød.

I løpet av dagen varierer mengden protein utskilt i urinen. For å objektivt vurdere tapet av protein i urinen, introdusere begrepet daglig protein i urinen. Denne verdien er målt i g / dag.

For en rask vurdering av det daglige proteinet i urinen, bestemmes mengden protein og kreatinin i en enkelt del av urinen, deretter trekkes et protein / kreatininforhold fra protein tapet per dag av forholdet.

Metoden er basert på det faktum at graden av utskillelse av urin kreatinin er konstant, endres ikke i løpet av dagen. I en sunn person er det normale forholdet mellom protein og kreatinin i urinen 0,2.

Denne metoden eliminerer mulige feil som kan oppstå når du samler daglig urin.

Kvalitative tester oftere enn kvantitative tester gir falske positive eller falske negative resultater. Feil oppstår i forbindelse med medisinering, kostvaner, fysisk aktivitet på dagen før analysen.

Dekoding av denne kvalitative testen er gitt ved visuell vurdering av turbiditet i testrøret i forhold til testresultatet med kontrollen:

1. svak positiv reaksjon er estimert som +;
2. positiv ++;
3. kraftig positiv +++.

Geller-ringprøven vurderer nøyaktigere proteininnholdet i urinen, men tillater ikke kvantifisering av proteinet i urinen. I likhet med sulfosalicylsyre-testen gir Geller-testen bare en grov ide om urinproteininnholdet.

Metoden gjør det mulig å vurdere graden av proteinuria kvantitativt, men for tidskrevende, unøyaktig, siden med sterk fortynning reduseres nøyaktigheten av vurderingen.

For å beregne proteinet må du multiplisere graden av fortynning av urin med 0, 033 g / l:

Testen krever ingen spesielle forhold, denne prosedyren er enkel å gjøre hjemme. For å gjøre dette må du senke teststrimmelen i urinen i 2 minutter.

Resultatene vil bli uttrykt av antall plusser på strimlen, dekoding av disse er i tabellen:

1. Testresultater tilsvarende verdier på opptil 30 mg / 100 ml tilsvarer fysiologisk proteinuri.
2. Verdiene på teststrimler 1+ og 2 ++ betyr signifikant proteinuri.
3. Verdiene av 3 +++, 4 ++++ er merket med patologisk proteinuri forårsaket av nyresykdommer.

Teststrimler kan bare omtrent bestemme det økte proteinet i urinen. De brukes ikke til nøyaktig diagnostikk, og enda mer kan de ikke si hva det betyr.

Ikke la teststrimler tilstrekkelig vurdere mengden protein i urinen hos gravide kvinner. En mer pålitelig metode for vurdering er bestemmelse av protein i daglig urin.

Bestemmelse av urinprotein ved hjelp av teststrimler:

Daglig protein i urinen er en mer nøyaktig diagnose av vurderingen av nyrens funksjonelle tilstand. For dette må du samle all urinen utskilt av nyrene per dag.

Proteininnholdet i urinen kan bli funnet ved forholdet mellom protein: kreatinin, dataene er vist i tabellen:

Gyldige verdier for protein / kreatininforholdet er dataene i tabellen:

Med tap av mer enn 3,5 g protein per dag, kalles tilstanden massiv proteinuri.

Hvis det er mye protein i urinen, er det nødvendig med en ny undersøkelse etter 1 måned, deretter etter 3 måneder, ifølge resultatene som fastslår hvorfor normen overskrides.

Årsaker til økt protein i urinen er økt produksjon i kroppen og brudd på nyrene, skiller proteinuria:

• fysiologiske - mindre avvik fra normen skyldes fysiologiske prosesser, løses spontant;
• patologiske - endringer skyldes den patologiske prosessen i nyrene eller andre organer i kroppen, uten at behandlingen utvikler seg.

En liten økning i protein kan observeres med rikelig proteinernæring, mekaniske forbrenninger, skader, ledsaget av økt produksjon av immunglobuliner.

En mild proteinuri kan skyldes fysisk anstrengelse, psyko-emosjonell stress, eller å ta visse medisiner.

Den fysiologiske proteinuri er en økning i urinprotein hos barn i de første dagene etter fødselen. Men etter en uke i livet, anses proteininnholdet i barnets urin som en avvik fra normen og indikerer en utviklende patologi.

Nyresykdom, smittsomme sykdommer er også noen ganger ledsaget av utseendet av protein i urinen.

Slike tilstander samsvarer vanligvis med en mild grad av proteinuri, er forbigående fenomener, går raskt på egenhånd uten å kreve spesiell behandling.

Mer alvorlige forhold, er alvorlig proteinuri rapportert i tilfelle av:

• glomerulonefritt;
• diabetes;
• hjertesykdom;
• blærekreft;
• flere myelom;
• infeksjon, narkotikaskade, polycystisk nyresykdom;
• høyt blodtrykk;
• systemisk lupus erythematosus;
• Goodpasturesyndrom.

Intestinal obstruksjon, hjertesvikt og hypertyreose kan forårsake spor av protein i urinen.

Varianter av proteinuri er klassifisert på flere måter. For en kvalitativ vurdering av proteiner kan man bruke Yaroshevsky klassifiseringen.

Ifølge systematikken til Yaroshevsky, skapt i 1971, utmärker proteinuri:

1. nyre - som inkluderer brudd på glomerulær filtrering, frigjøring av protein av tubuli, mangel på re-adsorpsjon av proteiner i tubulene;
2. prerenal - forekommer utenfor nyrene, utskillelse av hemoglobin, proteiner som forekommer i overskudd i blodet som følge av flere myelomer;
3. Postrenal - forekommer på urinveiene etter nyrene, utskillelsen av protein i ødeleggelsen av urinorganene.

For en kvantitativ vurdering av hva som skjer, er betinget proteinuria grader isolert. Det må huskes at de enkelt kan passere inn i en tyngre uten behandling.

Det mest alvorlige stadiet av proteinuri utvikler seg med tap av mer enn 3 g protein per dag. Tapet av protein fra 30 mg til 300 mg per dag tilsvarer moderat stadium eller mikroalbumuri. Opptil 30 mg protein i daglig urin betyr mild proteinuri.

Proteinnorm i urinen hvor mye?

Normalt protein i urinen er praktisk talt fraværende (mindre enn 0,002 g / l). I enkelte tilfeller kan imidlertid en liten mengde protein forekomme i urinen hos friske individer etter inntak av mye proteinmat, som følge av kjøling, med følelsesmessig stress, langvarig fysisk anstrengelse (den såkalte marsjerende proteinuri).

Utseendet til en betydelig mengde protein i urinen (proteinuri) er en patologi. Årsaken til proteinuri kan være nyresykdom (akutt og kronisk glomerulonephritis, pyelonefrit, gravid nefropati, etc.) eller urinveier (betennelse i blæren, prostata, urinledere). Renal proteinuri kan være organisk (glomerulær, tubulær og overflødig) og funksjonell (febril proteinuri, ortostatisk hos ungdom, når overfeeding spedbarn, hos nyfødte). Funksjonell proteinuri er ikke forbundet med nyrepatologi. Den daglige mengden protein varierer hos pasienter fra 0,1 til 3,0 g eller mer. Sammensetningen av urinproteiner bestemmes ved elektroforese. Utseendet i urinen av Bens-Jones-protein er karakteristisk for myelom og Waldenstrom-makroglobulinemi, # 223; 2 mikroglobuliner i tilfelle skade på nyrene.

Normalt protein i urinen er praktisk talt fraværende (mindre enn 0,002 g / l).

De viktigste tegn på sykdom oppdaget i studien av urin.

SG Spesifikke vekt. En reduksjon av den spesifikke vekten indikerer en reduksjon i nyrenees evne til å konsentrere urin og utskille toksiner fra kroppen, slik det er tilfelle med nyresvikt. Økningen i spesifikk vekt er forbundet med en stor mengde sukker i urinen, salter. Det skal bemerkes at det er umulig å evaluere tyngdekraften for bare en urintest, det kan være tilfeldige endringer, det er nødvendig å gjenta urinanalysen 1-2 ganger.

Proteinprotein i urinen - proteinuri. Årsaken til proteinuri kan skade nyrene selv i nephritis, amyloidose og skade ved giftstoffer. Protein i urinen kan også oppstå på grunn av urinveis sykdommer (pyelonefrit, cystitis, prostatitt).

Glukose Glukose (sukker) i urinen - glykosuri - oftest på grunn av diabetes. En sjeldnere årsak er nederlaget i nyrene. Det er svært forstyrrende hvis ketonlegemer oppdages sammen med sukker i urinen. Dette skjer med alvorlig, feiljustert diabetes og er en harbinger av de mest alvorlige komplikasjoner av diabetes - diabetisk koma.

Bilirubin, urobilinogen Bilirubin og urobilin er bestemt i urinen i ulike former for gulsott.

Erythrocytter Erythrocytter i urin - hematuri. Dette skjer enten med nederlag av nyrene selv, oftest med betennelse eller hos pasienter med urinveisykdommer. Hvis for eksempel en stein beveger seg langs dem, kan den skade slimhinnen, det kommer røde blodlegemer i urinen. En forfallende nyretumor kan også føre til hematuri.

Leukocytter Leukocytter i urinen - leukocyturi, oftest resultatet av inflammatoriske forandringer i urinveiene hos pasienter med pyelonefrit, cystitis. Leukocytter er ofte bestemt av betennelse i de kvinnelige ytre kjønnsorganene, hos menn, ved betennelse i prostata.

Cylindrs Sylindere er spesielle mikroskopiske strukturer. Hyaline sylindere i mengden 1-2 kan være i en sunn person. De dannes i nyretubuli, den sitter fast sammen med proteinpartikler. Men økningen i deres antall, sylindere av andre typer (granulær, erytrocyt, fett) indikerer alltid skaden på selve nyrene. Det er sylindere i inflammatoriske sykdommer i nyrene, metabolske lesjoner, som for eksempel diabetes.

Informativ metode og dens grenser. Informasjonsinnholdet i den generelle urintesten for anerkjennelse av spesifikke sykdommer i nyrene er lav, krever vanligvis flere, mer nøyaktige studier. Men forskning er svært viktig, spesielt når det foregår forebyggende studier, da det gjør det mulig å identifisere tidlige tegn på nyresykdom. Det er også kjent at ofte nyresykdom oppstår skjult, og bare urinstudien tillater dem å mistenke og gjennomføre ytterligere nødvendig undersøkelse.

I de fleste laboratorier, når du undersøker urin for protein, må du først bruke kvalitative reaksjoner som ikke oppdager protein i urinen til en sunn person. Hvis proteinet i urinen oppdages ved kvalitative reaksjoner, utføres kvantitativ (eller semi-kvantitativ) bestemmelse. Samtidig er funksjonene til de brukte metodene som dekker et annet spekter av uroproteiner viktige. Ved bestemmelse av protein ved anvendelse av 3% sulfosalicylsyre blir mengden protein således ansett som normalt opptil 0,03 g / l, mens pyrogallolmetoden øker grensen for normale proteinverdier til 0,1 g / l. I denne forbindelse er det i analysen form nødvendig å indikere den normale verdien av proteinet for metoden som brukes av laboratoriet.

Ved bestemmelse av minimale mengder protein anbefales det å gjenta analysen. I tvilstilfeller bør det daglige tapet av protein i urinen bestemmes. Normal daglig urin inneholder protein i små mengder. Under fysiologiske forhold blir det filtrerte proteinet nesten fullstendig reabsorbert av epitelet av proksimale tubuli og innholdet i den daglige mengden urin varierer i henhold til forskjellige forfattere fra spor opp til 20 50, 80 100 mg og til og med opptil 150 200 mg. Noen forfattere mener at den daglige utskillelsen av protein i mengden 30 50 mg / dag er den fysiologiske normen for en voksen. Andre mener at utskillelse av urinprotein ikke skal overstige 60 mg / m2 kroppsoverflate per dag, unntatt den første måneden av livet, når verdien av fysiologisk proteinuri kan være fire ganger høyere enn de angitte verdiene.

Den generelle tilstanden for utseendet av proteiner i urinen til en sunn person er deres ganske høye konsentrasjon i blodet og molekylvekten på ikke mer enn 100.200 kDa.

Dette er ikke normen, med diagnosen er det mulig, en annen ting er at for nefrotisk syndrom er det faktisk en liten indikator. Se på klinikken - hevelse, trykk etc., fortsett å ta den foreskrevne behandlingen..

og likevel vil jeg si: det er normalt ikke å være!